Diagnosticul de laborator al hepatitei virale C, B, A

Share Tweet Pin it

Virusul hepatitic este o boală infecțioasă inflamatorie a ficatului, cea mai frecventă patologie din lume, printre alte leziuni hepatice. În funcție de tipul de hepatită virală, diagnosticul bolii se bazează pe simptome clinice și pe teste de laborator. Un rol important îl joacă un istoric a bolii și o istorie epidemiologică atent elucidată. Există mai multe forme de hepatită virală, luând în considerare tipul de agent patogen, manifestările clinice, cursul și severitatea bolii. Diagnosticul de laborator al hepatitei virale este, în multe cazuri, singura metodă de a determina cu precizie boala. În prezent au fost identificate și studiate mai multe tipuri de virusuri cu efecte hepatotrope (A, B, C, D, E), care provoacă o imagine clinică similară. Datorită lipsei simptomelor și a dificultății de diagnosticare a hepatitei C, aceasta este considerată cea mai grea dintre toate speciile cunoscute.

Hepatita virală A

Are o transmisie fecală - orală, ceea ce o face o infecție răspândită. Diagnosticarea hepatitei A nu este dificilă. Perioada de incubație este relativ scurtă - de la 7 la 50 de zile; caracterizat printr-un debut acut: febră mare, sindrom astenic marcat, durere la toate articulațiile - se aseamănă clinic cu gripa. Durata bolii - 1 lună. Boala ușoară uneori nu necesită măsuri terapeutice speciale, există cazuri de auto-vindecare.

Virus hepatitic B

Pentru un curs subclinic, diagnosticul de laborator al hepatitei B este singura metodă exactă pentru verificarea unui diagnostic - antigenul virusului și anticorpii la proteina patogenă și ADN VHB sunt determinate în sânge. Modalități de transmitere:

  • parenteral - prin sânge;
  • sex - prin spermă;
  • verticale: de la mamă la făt (virusul nu este transmis copilului prin laptele matern).

Infecția intră în organism prin utilizarea de seringi murdare (utilizarea unui singur ac de către dependenții de droguri), prin instrumente (în timpul intervențiilor chirurgicale, tatuajelor, acupuncturii, piercingului urechii, manichiură, pedichiură) și transfuziei de sânge. Perioada latentă este de la 2 luni până la șase luni. Simptomele seamănă cu debutul hepatitei virale A: se dezvoltă un sindrom asemănător gripei, există dureri peste tot în organism și în articulații, slăbiciune mare, stare generală de rău. Uneori se produce o erupție cutanată. Prognosticul hepatitei acute este relativ favorabil: recuperarea survine în 80% din cazuri. Forma subclinică a bolii devine adesea cronică, rareori este posibilă obținerea unui tratament complet în astfel de cazuri.

În același timp, în multe cazuri de boală, se detectează satelitul hepatitei B - virusul D (delta), care provoacă hepatita virală D și agravează cursul bolii de bază.

Virusul hepatitic E este similar în cazul simptomelor clinice cu HAV, dar are un debut treptat și este mult mai periculos pentru femeile gravide.

Manifestări ale VHC

Diagnosticul de laborator al hepatitei C (VHC) în laborator este deosebit de important, deoarece aproximativ 3% din populația lumii este infectată cu ea. În fiecare an, incidența crește - aceasta este asociată cu o creștere constantă a dependenței de droguri în lume.

Atenție! Virusul hepatitic C este printre cele mai periculoase și mai severe dintre cele mai cunoscute forme de leziuni infecțioase ale ficatului. Se numește "ucigaș blând" din cauza cursului subclinic pentru o lungă perioadă de timp, și apoi un rezultat rapid al cirozei, cu un posibil rezultat fatal. Combinația dintre VHC și alte forme de hepatită infecțioasă agravează semnificativ evoluția bolii și accelerează moartea.

HCV acut este asimptomatic și, prin urmare, rar diagnosticat. Dacă este posibilă identificarea bolii în această fază, atunci cu începerea la timp a tratamentului cu 20%, poate apărea o recuperare.

VHC este cel mai adesea observat într-o formă cronică, în stadiile sale tardive. Procesul de cronizare are loc în 50% din cazuri.

Cu transportul asimptomatic al virusului C, celulele hepatice sunt deteriorate treptat, fibroza se dezvoltă. În plus, dacă nu se efectuează un tratament la timp, crește riscul de ciroză sau cancer la ficat.

Diagnosticul hepatitei virale, sub orice formă, se bazează pe definiția:

  • agentul patogen și replicarea acestuia;
  • markerii de infecție.

Metodele de diagnostic includ reacții imunochemice și biologice moleculare, care dezvăluie:

  • antigeni patogeni;
  • anticorpi împotriva virusului;
  • acizi nucleici.

Structura virusului C

Virusul C (BC) are ARN monocatenar în genomul său. El este singurul dintre agenții cauzali ai hepatitei virale, având o astfel de structură. Atât transportatorul cât și pacientul nu pot ghici despre virusul pe care îl au. Prin urmare, pentru a identifica patologia cu un diagnostic neclar, este necesar să se efectueze o serie de studii și teste de diagnosticare.

Genomul virusului C (ARN-ul său) constă din 10 mii de nucleotide baze. O astfel de eterogenitate ridicată determină caracteristicile VHC. În studiul nucleotidelor ARN s-au evidențiat diferențe semnificative în structura lor. Având în vedere caracteristicile structurale detectate, a fost creată o clasificare VHC, conform căreia se disting următoarele:

  • opțiuni (există 6 - 9);
  • subtipuri;
  • genotipuri.

Unele dintre ele se găsesc în toate țările lumii, fără excepție, unele local în anumite regiuni. Când virusul C intră în organism, acesta este inserat în lanțul nucleotidic al moleculei de ARN. Este mutat în mod constant (modificat), și o persoană poate deveni imediat un transportator de 50 de subtipuri ale unui singur genotip de virus. Sistemul imunitar nu ține pasul cu mutația rapidă: anticorpii sunt produși pentru un grup de virusuri, boala devine cronică.

Definiția virus C

Diagnosticarea VHC a devenit o realitate odată cu apariția biologiei moleculare. Acest lucru se explică prin conținutul extrem de scăzut al virusului din sânge, care nu permite izolarea antigenelor sale prin metode disponibile anterior.

În cazul în care se suspectează VHC, diagnosticul de laborator vizează:

  • anticorpii (IgG, IgM) prin ELISA (analiză imunosorbantă legată de enzime);
  • Virusul ARN utilizând PCR (reacție în lanț a polimerazei).

Atenție! Semnele serologice de hepatită C sunt ARN - VHC și anticorpii care se formează în organism.

PCR - definiția virusului hepatitei C

ARN - HCV aparține markerilor timpurii ai HCV: apariția sa în sânge are loc la 10 până la 12 zile după infecție, cu mult mai devreme decât creșterea aminotransferazelor (AST, ALT, GGT). Detectarea ARN - HCV indică replicarea activă (reproducere) a virusului. Acesta este "standardul de aur" al diagnosticului, deoarece clarifică și confirmă diagnosticul chiar și în perioada în care simptomele bolii sunt practic absente. PCR trebuie efectuată pentru a monitoriza rezultatele testului ELISA. Ea se realizează în variante calitative și cantitative.

Sarcina virală este considerată ridicată cu PCR> 800 mii UI / ml sau 2 milioane copii / ml; scăzut - cu PCR

Atenție! PCR nu este doar o analiză calitativă (detectarea virusului ARN), ci determină și numărul de copii ale ARN în 1 ml de sânge. Acesta joacă un rol important în prescrierea unui tratament eficient și evaluarea succesului în terapie. Dacă ARN-ul virusului C este detectat în plasma sanguină, aceasta indică o fază acută a bolii. Gradul de afectare a ficatului și răspândirea modificărilor patologice - fibroza și inflamația - se constată după o biopsie. Această metodă este cea mai informativă și mai fiabilă în diagnosticare. Manipularea este complet inofensivă pentru pacient și durează câteva secunde.

ELISA - determinarea anticorpilor la virus

Sistemul imunitar uman, atunci când este ingerat de orice agent infecțios, produce anticorpi (IgG, IgM) la agentul patogen. Imunoglobulinele rezultate creează un complex puternic cu o proteină străină (cu un antigen al virusului), parametrii cantitativi și calitativi ai acestora fiind determinați în timpul testului ELISA. Se referă la o metodă indirectă de examinare: în timpul testului, virusul nu este detectat, dar se produce răspunsul imun organismului la agentul infecțios invadator. Testul ELISA este efectuat pentru diagnosticarea precoce, observarea procesului în timp.

Anticorpii sunt detectați la 80% dintre cei infectați cu numai 5-6 săptămâni după declanșarea bolii, în 90% până la 12 săptămâni. Uneori aceste analize dau răspunsuri false pozitive. În astfel de cazuri, există teste speciale - spectrul de proteine ​​de anticorpi este determinat prin imunoblotting recombinant.

Pentru a obține rezultate fiabile, screening-ul cu PCR și ELISA se efectuează de două ori cu o anumită perioadă de timp. De regulă, perioada de timp este de 6 luni.

Tactica de observare

Pentru a clarifica activitatea procesului în ficat, pentru a determina tactica tratamentului, sunt determinate testele hepatice:

  • transaminazele sanguine (ALT, AST, GGT);
  • bilirubina totală și fracțiunile acesteia;
  • fosfatază alcalină (fosfatază alcalină);
  • proteine ​​totale cu fracțiuni.

În funcție de rezultatele cercetărilor de laborator, se aplică diferite tactici de gestionare a pacienților:

  • Cu numere normale, pacientul este sub supravegherea unui medic. Odată cu schimbarea bunăstării, analizele se repetă.
  • Cu o creștere de 2 sau mai multe ori, se efectuează ELISA pentru anti-HCV.
  • Dacă testul imunologic al enzimei este pozitiv, se utilizează PCR - o reacție în lanț a polimerazei, ale cărei rezultate sunt utilizate pentru a selecta terapia antivirală.
  • La crescute de 2 ori sau mai mulți indicatori ai probelor de ficat, dar un test ELISA negativ sau prin creșterea eșantioanelor hepatice de 2 ori, monitorizarea dinamică negativă pozitivă IFA și PCR continuă cu inspecția și controlul testelor biochimice sanguine 1 la fiecare 3 luni.
  • Cu indicii biochimici înalți, rezultate pozitive ale ELISA și PCR, se efectuează diagnostice clinice, se selectează un medicament antiviral și se monitorizează tratamentul.

Studiul parametrilor biochimici

Conform rezultatelor analizei biochimice a sângelui, nivelul de aminotransferaze este evaluat.

  • ALT - alanin aminotransferaza - face parte din hepatocite. Chiar și un mic exces de normă indică prezența hepatitei (inclusiv virale) în stadiile incipiente.
  • AST - aspartat aminotransferaza: dacă nivelul său depășește ALT, este un indicator al fibrozei incipiente (proliferarea țesutului conjunctiv).

ALT înalt, AST în sânge este rezultatul necrozei celulare hepatice. Ele sunt un indicator indirect al activității procesului inflamator. Dacă valorile ALAT depășesc de 3 ori mai mare decât norma, vorbim despre activitatea minimă, de 3 - 10 ori -umerennaya activitatea inflamatorie proces, mai mult de 10 de ori - hepatita cu activitate ridicată.

Nivelul AST se modifică și în alte patologii, ALT este considerat mai specific pentru bolile hepatice.

  • O creștere a nivelului bilirubinei totale și directe are loc cu o formare crescută sau cu îndepărtarea lentă din organism. Hepatita virală apare în încălcarea eliminării bilirubinei. Mucoasele mucoase și sclerele medii mctrice sunt observate la niveluri de bilirubină de peste 30-35 mmol / l, cu acumularea ulterioară, pielea devine galbenă. În cursul cronicilor acest lucru nu se întâmplă.
  • Creșterea fosfatazei alcaline (fosfatază alcalină), gamma-glutamintransferaza (GGT), colesterolul și acizii biliari sunt caracteristice sindromului. Dar boala hepatică nu este singurul motiv pentru creșterea lor.
  • O creștere a albuminei este asociată cu afectarea funcției hepatice.

Diagnostic clinic

Manifestările clinice sunt în favoarea hepatitei virale C. Cursa cronică este caracterizată prin simptomatologie redusă: anxietatea și oboseala crescută până la sfârșitul zilei, o scădere a toleranței la efortul fizic obișnuit, îngrijorarea. În analizele biochimice normale, astfel de manifestări clinice sunt rareori asociate cu hepatitele virale. tablou clinic Desfasurat apare in etapele ulterioare: acolo telangiectazie și „stele“ hepatice, hepato - și splenomegalie, icter sclerei, pielea și membranele mucoase ale gurii, mâncărime a pielii (cu un nivel foarte ridicat de bilirubină în sânge), urina inchisa la culoare, fecale decolorate, sângerare, pierderea în greutate, palmele hepatice.

Atenție! În prezența VHC poate forma cu mare probabilitate a dezvolta cancer la ficat, prin urmare, este necesar, la intervale regulate de timp (1, la fiecare șase luni) pentru a investiga sange pentru markeri tumorali si alfa - fetoproteinei.

examinarea cu ultrasunete

În plus față de metodele de laborator, există metode suplimentare de examinare care joacă un rol important în diagnosticul VHC. Acestea includ OBP cu ultrasunete. Prin această metodă de examinare, se examinează starea organelor cavității abdominale. Sunt determinate dimensiunile, densitatea, structura, aranjarea organelor, leziunile volumului, concrementele, perturbarea debitului de bilă, dimensiunea portalului și venele splenice. Splenomegalia, hepatomegalia, extinderea venei portalului indică hepatita cu trecerea la ciroză. În continuare, este necesară o serodiagnosticare pentru a exclude sau a confirma hepatita virală C.

Fibroscan și alte teste

Metoda de diagnostic indirect, echivalentul biopsiei - fibroscanning (elastometria): neinvazivă, sigură, poate fi efectuată în mod repetat pentru a monitoriza terapia. Indicațiile pentru elastometrie sunt presupuse procese patologice în ficat, inclusiv prezența unui virus.

Există, de asemenea, numeroase teste diagnostice care reprezintă o alternativă la biopsia hepatică. Testele oferă posibilitatea de a determina imaginea morfologică exactă a organului afectat, fibroza existentă, steatoza, necroza sau inflamația. Unele dintre ele sunt:

  • FibroTest - cu ajutorul acestuia, o analiză cuprinzătoare a 5 parametri biochimici și diagnosticarea în timp util a stadiilor de fibroză.
  • AktiTest - identifică 6 parametri biochimici și face posibilă diagnosticarea procesului necro-inflamator în ficat.

Atenție! Prognosticul VHC depinde de diagnosticarea în timp util, de gradul de infecție și de dorința pacientului de a se recupera. Metodele moderne terapeutice cu utilizarea medicamentelor antivirale fac posibilă vindecarea bolii sau obținerea remisiunii pe termen lung, prelungirea vieții și îmbunătățirea calității acesteia într-o persoană sau transportator infectat. Virusul hepatitic C, în ciuda diagnosticului dificil și a tratamentului pe termen lung, nu este o propoziție. Este necesar să se consulte un medic în timp util pentru a primi asistență medicală de înaltă calitate și pentru a-și îndeplini cu atenție toate numirile.

Diagnosticul hepatitei B și hepatitei C. Examinare

Hepatita este numele comun pentru procesele inflamatorii din ficat. Cel mai adesea, virusurile hepatitei B și hepatitei C cauzează hepatită. Se pot infecta atunci când efectuează piercing-uri, tatuaje, maniuri sau medicamente intravenoase. Există un risc ridicat de infecție la dentist, în timpul intervenției chirurgicale, la transfuzia de sânge. Hepatita B este transmisă sexual și de la mamă la copil în timpul sarcinii (riscul este de aproximativ 30-40%). Pentru hepatita C, acest mod de transmitere este puțin relevant.

Simptomele hepatitei virale B și hepatitei C sunt similare.

Imaginea clinică este diferită în forme acute și cronice.

Hepatita virală acută este un proces inflamator în țesutul hepatic cauzat de o infecție recentă (mai mică de 6 luni). Hepatita virală cronică este o leziune hepatică inflamatorie-distrofică cu o fibroză moderată de mai mult de 6 luni.

Simptomele hepatitei virale sunt cauzate de intoxicație din cauza detoxificării hepatice și a colestazei (încălcarea fluxului bilă). Mai întâi, există un efect cerebrotoxic, care duce la oboseală crescută, la tulburări de somn (în forma ușoară a hepatitei acute și la hepatita cronică).

În cazul unui curs acut al bolii, perioada inițială durează aproximativ 2-3 săptămâni. Este însoțită de dureri articulare, slăbiciune, indigestie (greață, vărsături, pierderea poftei de mâncare), febră, mai ales de multe ori cu hepatită virală B. Icterul datorat colestazei este, de asemenea, mai caracteristic hepatitei B. Aceasta schimbă culoarea urinei (întunericul) și a fecalelor ). Deseori forma acută este în general asimptomatică, în special la hepatita C.
Hepatita virală acută B în 80% dintre cazuri se termină cu recuperare, iar în 20% devine cronică. În cazul hepatitei C, evoluția cronică se dezvoltă la aproximativ 90% dintre pacienții adulți și la 20% dintre copii. Forma cronică este cea mai periculoasă, deoarece se transformă adesea în ciroză hepatică.

La pacienții netratați, depresia mentală și oboseala pot fi singurele manifestări ale hepatitei cronice virale chiar înainte de a se face un diagnostic. În stadiile ulterioare ale hepatitei cronice, cu fibroză extensivă și ciroză, sindromul hipertensiunii portale, care amenință viața din cauza acumulării de lichid în cavitatea abdominală (ascite) și a posibilei sângerări interne, se află în prim plan.

La prima apariție a simptomelor caracteristice hepatitei, este necesar să se efectueze un examen de diagnostic pentru virusurile hepatitei B (B) și C. Având în vedere faptul că este posibil un curs asimptomatic al bolii, precum și ușurința de infectare, testarea virusurilor hepatitei trebuie efectuată în mod regulat și pentru hepatita virală B vaccinate.

Metode utilizate pentru detectarea infecției cu hepatită C

Cea mai severă formă de hepatită virală este hepatita C. Doar acest virus se caracterizează prin prezența ARN în compoziția sa. Suspiciunea de penetrare și răspândirea virusului în organism apare în cazul creșterii activității enzimelor hepatice. Un factor suplimentar care indică necesitatea diagnosticării este apartenența unui transportator posibil la un grup de risc.

Sfaturi de la hepatologi

În 2012, a avut loc un progres în tratamentul hepatitei C. Au fost dezvoltate noi medicamente antivirale cu acțiune directă, care, cu o probabilitate de 97%, vă scot complet de boală. De acum înainte, hepatita C este considerată oficial o boală complet tratabilă în comunitatea medicală. În Federația Rusă și în țările CSI, medicamentele sunt reprezentate de sofosbuvir, daclatasvir și ledipasvir. În prezent, pe piață există o mulțime de falsuri. Medicamentele de bună calitate pot fi achiziționate numai de la companiile licențiate și de la documentația relevantă.
Accesați site-ul oficial al furnizorului >>

În majoritatea cazurilor, boala dispare fără semne speciale, iar transportatorul poate să nu știe că corpul său este infectat cu VHC. Pentru a detecta o boală, este necesar să se efectueze o serie de studii și teste.

Dacă rezultatele acestor teste sunt discutabile, specialistul poate ordona o reexaminare a pacientului.

La om, ficatul îndeplinește funcțiile unui mini-laborator. Când virusurile penetrează, acestea dau un semnal despre aceasta - o încălcare a producției anumitor enzime sau o scădere a activității lor, parametrii biochimici ai schimbării sângelui datorită înlocuirii sau apariției unor noi substanțe.

De exemplu, un semn indirect al prezenței VHC în organism poate fi o modificare a activității enzimelor ALT și AST transferazelor, care sunt eliberate în sânge din cauza bolilor de țesut hepatic.

Dar acest factor poate indica alte boli ale ficatului și ale organelor interne, astfel că experții au dezvoltat metode deosebit de eficiente pentru a diagnostica virusul hepatitei C.

Pentru a verifica dacă există o boală, este necesar să se efectueze studii de laborator, de laborator și de natură clinică.

Simptome generale ale bolii

Boala poate să apară într-o formă latentă și să intre în stadiul cronic, iar această opțiune este fixată în majoritatea cazurilor. Cu toate acestea, după sfârșitul perioadei de incubație a virusului, care poate dura până la o lună, pot apărea anumite semne care seamănă cu simptomele gripei. Este important să le acordați atenție la timp și să verificați prezența VHC.

Aceste semne includ:

  • deteriorarea generală a sănătății;
  • creșterea temperaturii corpului;
  • durere la nivelul mușchilor și articulațiilor;
  • mai rar - apariția reacțiilor cutanate.

Aceste simptome apar în mod treptat, astfel încât pacientul poate confunda cu ușurință starea sa cu o răceală obișnuită sau aceeași gripa.

Dar, după câteva zile, natura cursului bolii se schimbă. apar:

  • durere la nivelul hipocondrului drept;
  • agravarea sau pierderea apetitului complet;
  • urină întunecată;
  • clarificarea fecalelor;
  • greață, nevoia de a vomita.

Dacă timpul nu începe tratamentul, boala intră într-o etapă cronică.

Semnele unei astfel de schimbări în natura bolii sunt câteodată atât de invizibile încât o persoană infectată nu le acordă nici o importanță, scotând totul ca oboseală banală. Dar, de fapt, ele necesită o atenție deosebită și examinare de către specialiști.

Recent am citit un articol care povestește despre utilizarea complexului de medicamente "SOFOSBUVIR DAKLATASVIR "pentru tratamentul hepatitei C. Cu ajutorul acestui complex, puteți să ÎNTOTDEAUNA să scăpați de HEPATITIS C.

Nu eram obișnuit să am încredere în informații, dar am decis să verific și să comand. Medicamentele nu sunt ieftine, dar viața este mai scumpă! Nu am simțit niciun efect secundar din recepție, m-am gândit deja că totul a fost în zadar, dar o lună mai târziu am trecut testul, iar PCR nu a fost detectat, nu a fost detectat după o lună de tratament. Starea de spirit îmbunătățită în mod dramatic, din nou a existat dorința de a trăi și de a vă bucura de viață! Am luat medicamente timp de 3 luni și, ca urmare, virusul a fost făcut. Încearcă-o și tu, și dacă cineva este interesat, atunci link-ul la articolul de mai jos.

Acestea sunt simptome precum:

  • debutul rapid al oboselii;
  • rău fizic și incapacitatea de a face față sarcinilor obișnuite;
  • disconfort în abdomen;
  • vărsături frecvente și greață;
  • dureri musculare și articulare;
  • disfuncției intestinale.

În cazul în care boala dobândește un curs cronic, apariția icterului, o creștere a mărimii ficatului și a splinei, apariția sângerărilor, scăderea în greutate se înregistrează. Aceasta amenință ciroza hepatică sau apariția cancerului.

Prezența semnelor de mai sus sau preocupările legate de penetrarea VHC în sânge sugerează că este necesar să se efectueze o examinare completă a stării de sănătate și să se asigure asistență medicală de calitate. O astfel de intervenție implică teste de laborator pentru a confirma infecția și răspândirea virusului în organism.

Teste de laborator

Diagnosticarea hepatitei C și prescrierea ulterioară a regimului de tratament este inclusă în competența profesională a specialistului în bolile infecțioase care se specializează în recunoașterea cursului acut al bolii. Dacă pacientul are o formă cronică a bolii, ar trebui să consulte un hepatolog.

Pentru a studia procesul de schimbare a stării ficatului, pacientul este recomandat să efectueze studii precum testele pentru nivelul bilirubinei și enzimelor hepatice (ALT).

De asemenea, este obligatorie luarea probelor de ficat pentru biochimie, studiul căruia vă permite să verificați prezența bolii și gradul de afectare a celulelor hepatice. Anomaliile detectate ale organismului sugerează un test de sânge pentru prezența VHC.

Existența unui virus și a caracteristicilor acestuia sunt detectate prin utilizarea markerilor specifici. Acestea sunt markeri ai ARN anti-IgM / G și HCV. Astfel de analize sunt prezentate prin două tipuri de studii:

Imunologică (ELISA). Această specie se bazează pe determinarea existenței anticorpilor la virusul din sânge. Prezența anticorpilor este un indicator valabil al VHC. Ele sunt produse de organism (și anume leucocite din sânge) pentru a distruge virusul. După ce o persoană a fost bolnavă, anticorpii rămân în sânge pentru viață. Aceasta este o reacție protectoare a sistemului imunitar.

Dacă acest test este pozitiv, apare o suspiciune de infecție. În continuare, transportatorul potențial trebuie să treacă printr-un set de metode de diagnosticare confirmatoare. Acest lucru se datorează faptului că existența anticorpilor nu este o dovadă directă a prezenței bolii. Poate că organismul a interacționat odată cu virusul, de exemplu, în timpul vaccinării. Sau, de exemplu, un rezultat pozitiv fals poate fi adesea înregistrat la femeile gravide.

Pentru a face un diagnostic corect, un specialist trebuie să verifice rezultatele studiilor genetice. Avantajul incontestabil al acestor teste este abilitatea de a diagnostica stadiul incipient al bolii, ușurința de utilizare, capacitatea de a controla progresia infecției. Dezavantajele testului ELISA pot fi atribuite incapacității de a determina prezența unui virus și numai anticorpii corespunzători acestuia;

Genetică (PCR). Această specie se bazează pe determinarea materialului genetic HCV din sânge prin PCR (metoda de reacție în lanț a polimerazei). Se determină prezența ARN-ului virusului. Ca urmare, devin disponibile date privind concentrația virusului, afilierea acestuia la un anumit tip. Această metodă este capabilă să detecteze chiar și o mică concentrație de VHC.

Deoarece boala poate avea o natură diferită de apariție și, în consecință, diferitele tipuri de virusuri care au cauzat aceasta, un studiu PCR vă permite să obțineți cele mai complete informații despre caracteristicile etiologice ale virusului particular care a provocat boala. Avantajele acestui tip de analiză sunt considerate a fi studiul calitativ și cantitativ al VHC în ser. Aceasta permite medicului să prescrie schema optimă de a scăpa de boală, să monitorizeze dinamica evoluției bolii, să evalueze eficiența metodelor de tratament alese.

Această analiză constă în trei etape - aceasta este o PCR calitativă, apoi PCR cantitativă și determinarea genotipului. Datorită celor mai recente cercetări, specialistul poate efectua cel mai eficient terapia bolii și poate aplica medicamentele corespunzătoare tipului specific de virus. Acest lucru vă va ajuta să scăpați de boală cât mai curând posibil.

După efectuarea unui set de teste de laborator, medicul prescrie regimul optim de tratament:

  • dacă parametrii biochimici se află în limitele normale, se stabilește observația stării pacientului și se atribuie repetări periodice ale studiilor;
  • în prezența unor teste anormale ale funcției hepatice, rezultate pozitive ale ELISA și PCR, specialistul prescrie teste clinice, atribuie schema de tratament și control asupra dinamicii bolii și eficacității agenților selectați și a medicamentelor.

Care este caracteristica diagnosticului clinic? Pentru a identifica gradul de afectare a ficatului prin metoda ultrasunetelor. Pe baza datelor obținute în timpul ultrasunetelor, specialistul poate evalua modificările dimensiunii unui organ, structura acestuia, structura, densitatea țesuturilor și, în unele cazuri, funcțiile.

Date mai precise privind starea ficatului dau o analiză biopsică, prin care se determină gradul de fibroză și necroză și leziunile inflamatorii.

Pe baza tuturor tipurilor de diagnostice, medicul determină diagnosticul și prescrie cel mai eficient tratament. Dacă un specialist are îndoieli cu privire la prezența unui virus sau apartenența acestuia la un anumit tip, este posibil ca un potențial pacient să primească teste repetate sau suplimentare care să ajute la stabilirea unei imagini mai exacte a stării sale.

Hepatita C: modalități de infecție, diagnostic, metode de tratament

Hepatita C (hepatita C) este o boală inflamatorie a ficatului cauzată de infecția organismului cu virusul VHC, virusul hepatitei C. În timpul reproducerii virusului hepatitei C și a afectării țesuturilor hepatice, se dezvoltă procese patologice, se produce ciroză hepatică și se dezvoltă cancere. Această formă este considerată cel mai periculos tip de hepatită, nu numai datorită capacității sale de a întrerupe funcționarea generală a organismului și de a provoca boli care duc la dizabilitate sau deces, ci și datorită naturii cursului bolii. Simptomele hepatitei C nu sunt de obicei exprimate, infecția este latentă și nu există vaccinuri pentru hepatita C.

Ce este hepatita C (hepatita C)?

Hepatita C (VHC) a devenit cunoscută ca o boală separată cu mult înainte de descoperirea unui agent infecțios specific. Hepatita Non-A non-A, hepatita non-A, non-B (NANBH), ca boala, a avut manifestari care i-au permis sa aparțina grupului de hepatite, totuși evoluția bolii și complicațiile marcate ar fi diferite. Ulterior, virusurile care provoacă hepatită D și G au fost identificate, de asemenea, la varietăți de hepatită.
Pentru prima dată, o formă specială a virusului a fost izolată în 1989. În prezent, 6 genotipuri ale virusului HCV sunt identificate oficial, iar pentru încă 5 teste de laborator sunt efectuate. Este, de asemenea, cunoscut despre 90 de subtipuri de VHC. Cel mai frecvent tip este prima formă a virusului și este, de asemenea, responsabil pentru cea mai severă formă de hepatită C, rezistentă la terapia cu interferon.
Variabilitatea virusului hepatitei C, producerea de noi genotipuri în timpul infecției îngreunează crearea unui vaccin pentru această boală, care, în prezent, potrivit estimărilor statisticilor, sunt bolnave în jur de 150 de milioane de oameni din lume. Anual, aproximativ 350 de mii de oameni mor din cauza complicațiilor cauzate de hepatita C. Simptomele abstracte specifică conduc la situații în care diagnosticul de hepatită VHC este detectat întâmplător în timpul testelor sau este stabilit în stadiul de dezvoltare a complicațiilor. Mutațiile active ale virusului conduc la crearea de copii modificate ale genotipului, ceea ce provoacă un procent ridicat al formei cronice a bolii.

Semne ale hepatitei C

Foto: Jarun Ontakrai / Shutterstock.com

Apariția primelor semne de hepatită C depinde de rezistența organismului. De la momentul infecției până la simptomele primare pot dura între 2 săptămâni și 6 luni. Dacă suspectați contactul cu o infecție pentru diagnosticarea precoce, se efectuează un test de sânge prin PCR, care permite determinarea prezenței ARN-ului virusului în sânge, la 2 săptămâni după infectare.
Hepatita C se caracterizează printr-un "ucigaș blând": simptomele latente și complicațiile marcate duc la afectarea gravă a organismului în absența suspiciunii de prezență a VHC.
Primele simptome ale acestei forme de hepatită virală includ scăderea performanței, starea astenică, senzația de oboseală.
Semnele principale ale hepatitei C, care se manifestă în stadiul de reproducere pronunțată a virusului în organism, sunt considerate a fi:

  • scăderea sau lipsa apetitului;
  • greață;
  • slăbiciune generală, astenie, deteriorarea sănătății;
  • durere articulară;
  • Lichiditatea pielii, membranelor mucoase, sclere ale ochiului ca urmare a creșterii concentrației de bilirubină în sânge din cauza afectării hepatice a hepatitei C;
  • o creștere a dimensiunii ficatului și a splinei.

Cauzele hepatitei C, căile de infectare cu hepatita C

Modul de transmitere al virusului HCV este hematogen, cu sânge și alte fluide ale corpului. Agentul infecțios este prezent chiar și în cele mai mici picături de sânge și rămâne activ timp de până la 5 zile când lichidul se usucă la temperatura camerei. Infecția apare atunci când materialul biologic infectat cu HCV ajunge în alt organism în timpul procedurilor invazive, precum și la contactul cu suprafețele plăgilor (zgârieturi, abraziuni, fisuri și deteriorări ale membranelor mucoase etc.). În acest sens, există principalele căi de infectare:

  • prin injecții cu seringi reutilizabile nesterilizate, ace;
  • în timpul transfuziei de sânge, plasmă de la un donator infectat, transplant de organe și țesuturi;
  • în procesul de utilizare a instrumentelor nesterilizate în clinici dentare, saloane de înfrumusețare, saloane de manichiură, piercing, tatuare etc.;
  • cu contact sexual traumatic: doar fisuri minore pe suprafața mucusului;
  • traseu vertical de infecție: de la mamă la făt în timpul sarcinii;
  • traseul familial de infecție atunci când se folosesc lame, periuțe de dinți etc. (extrem de rare);
  • în timpul nașterii și procedurilor chirurgicale, răniri în condiții nesterile.

Inactivarea virusului apare atunci când suprafețele sunt tratate cu dezinfectanți care conțin clor, atunci când sunt tratate cu apă la o temperatură de cel puțin 60 ° C timp de 40 de minute sau la fierbere timp de trei minute.
Grupurile de risc, populațiile cu risc crescut de infecție VHC, includ personalul medical și angajații instituțiilor sanitare și epidemiologice, dependenții de droguri cu o metodă invazivă de administrare a drogurilor, persoanele cu un număr mare de sex neprotejat, partenerii sexuali ai pacienților infectați, inclusiv transportatorii ascunși ai hepatitei. C, persoanele cu boli autoimune, imunodeficiențe etc.
Virusul hepatitei C nu este transmis prin atingere, strângere de mână, prin picături din aer, există cazuri rare de infecție în timpul alăptării (dacă există răni, fisuri la nivelul mameloanelor orale ale mamei și deteriorarea mucoasei orale a copilului) și contactele de uz casnic când trăiesc împreună. Prevenirea infecției cu virusul hepatitei C este sterilizarea instrumentelor medicale și cosmetice pentru procedurile și injecțiile invazive, respectarea regulilor de igienă personală în viața de zi cu zi și metodele mecanice de protejare a contactelor sexuale cu partenerii necunoscuți.
Prevenirea infectării copilului cu hepatită C în timpul sarcinii este o terapie specială pentru reducerea încărcăturii virale în timpul gestației, precum și examinarea și tratamentul unei femei înainte de concepție.

Tipurile și stadiile de hepatită C

Se disting două forme de hepatită C. Forma acută a acestei infecții virale este diagnosticată în cazuri rare datorită unei imagini clinice neclară. Cel mai adesea, detectarea stării acute apare întâmplător în timpul examinărilor profilactice sau atunci când o persoană se adresează pentru diagnosticare în caz de contact suspect.
Cu un tratament prompt, 20% din forma acută de hepatită C este complet vindecată. În absența sau eșecul tratamentului, hepatita C acută intră într-o etapă cronică a bolii.
Hepatita C în formă cronică poate fi, de asemenea, asimptomatică, fără efect al încărcăturii virale asupra organismului, fără manifestări clinice și simptome specifice. Acest grup de transportatori de viruși ascunși face dificilă colectarea statisticilor privind prevalența VHC, deoarece este determinată numai de testele de sânge pentru markerii hepatitei, dar poate contribui la răspândirea infecției.
Cursul clasic al hepatitei cronice C este însoțit de deteriorarea celulelor hepatice și de dezvoltarea fibrozei tisulare. Dacă nu sunt tratate, focarele fibroase provoacă dezvoltarea cirozei hepatice, formarea de tumori canceroase și alte complicații periculoase.

Complicațiile pentru hepatita C

Foto: Den Rise / Shutterstock.com

Rata de dezvoltare a complicațiilor depinde de starea generală a corpului, capacitatea sistemului imunitar de a produce anticorpi, forma genotipului și prezența mutațiilor virusului, precum și stilul de viață și dieta unei persoane. Utilizarea alcoolului, alimentelor grase conduce la o accelerare semnificativă a proceselor patologice, a alcoolului, a hepatitei toxice.
Hepatita C poate provoca următoarele boli și tulburări:

  • fibroza tisulară a ficatului;
  • steatohepatită, înlocuirea țesutului hepatic cu grăsime;
  • ciroza hepatică;
  • carcinom hepatocelular, cancer de ficat;
  • hipertensiune arterială portală;
  • ascita, acumularea de lichide în organele peritoneale;
  • vene varicoase ale organelor interne;
  • hepatice encefalopatie;
  • intoxicația cronică a organismului cu produse de descompunere a țesuturilor și datorită funcției hepatice insuficiente;
  • sângerare internă ascunsă.

Hepatita C este, de asemenea, periculoasă, creând un risc crescut de apariție a hepatitei B atunci când este în contact cu o infecție datorată unei scăderi a funcției hepatice.

Diagnosticul hepatitei C

Următoarele metode sunt utilizate pentru a diagnostica hepatita C:

  • recoltarea și examinarea pacientului, palparea organelor peritoneale;
  • analiza biochimică a sângelui;
  • un test de sânge pentru anticorpi împotriva virusului hepatitei C (anti-HCV) și a ARN-ului HCV prin PCR;
  • un test de sânge pentru prezența anticorpilor de clasă IgM (IgM anti-HCV), care prezintă stadiul acut al bolii;
  • numărul total de sânge, un studiu al caracteristicilor de coagulare (coagulogramă);
  • examinarea ultrasonică a ficatului, splinei, organelor peritoneale.

În unele cazuri, numit în cadrul studiului de laborator al țesutului hepatic (biopsie).
Aceste metode vă permit să determinați prezența infecției și să stabiliți un diagnostic precis cu definiția genotipului VHC.

Tratamentul hepatitei virale C în diferite stadii

Hepatita C implică o terapie complexă care vizează atât susținerea organismului, cât și lupta împotriva acțiunii antivirale generale sau specifice a virusului HCV. Cursul terapiei pentru pacienții cu hepatită C include:

  • terapie cu medicamente antivirale;
  • luând medicamente pentru a menține funcțiile ficatului;
  • fortificarea medicamentelor, imunomodulatori, stimulatori ai imunității.

Cursul terapiei medicamentoase nu va fi eficient în caz de nerespectare a regulilor dieta, limitarea activității fizice, aderarea la regimul zilnic. Virusul hepatitei C afectează în mod agresiv sistemul imunitar uman și țesutul hepatic, ceea ce necesită o dietă sănătosă, o odihnă adecvată, excluzând probabilitatea contactului cu alte infecții virale și bacteriene.

Terapia antivirală tradițională pentru hepatita C

Pentru combaterea virusului HCV, medicamentele antivirale sunt folosite pentru a stimula sistemul imunitar al organismului. Ribavirina și interferonul-alfa sunt utilizate ca cele mai eficiente (recuperarea de 45-50%, în funcție de stadiul bolii și de genotipul VHC care a provocat hepatita), în funcție de stadiul și de starea generală a pacientului, individual sau în combinație.
Cursul general al terapiei cu aceste medicamente, dozajul și regimul este determinat de către hepatologul participant pe baza datelor de diagnosticare și a răspunsului pacientului la medicamente. Durata medie a terapiei antivirale cu aceste medicamente este de 12 luni.
Combinația de medicamente poate provoca reacții alergice, admiterea lor fiind inacceptabilă în timpul sarcinii și a unor afecțiuni. Eficacitatea tratamentului este evaluată pe baza unui test de sânge pentru a reduce nivelul încărcăturii virale (ARN VHC) și gradul de activitate a transaminazei.
Drogurile pot provoca efecte secundare semnificative. Recepția grupului de interferon în doze semnificative este adesea însoțită de o deteriorare semnificativă a sănătății, caracteristică perioadei de adaptare a organismului la medicament (până la 1 lună) și însoțită de hipertermie până la 38-39 ° C, dureri de cap și dureri articulare, pierderea în greutate, Astfel de simptome dispar pe cont propriu și nu necesită întreruperea medicamentului.
La 3-4 luni după începerea administrării medicamentelor din grupul de interferon, se poate observa o modificare a imaginii sanguine: o scădere a concentrației de trombocite, leucocite. În funcție de amploarea modificărilor, medicamentul poate fi suspendat pe scurt.
Complicațiile grave care necesită corectarea cursului tratamentului sunt sângerarea hemoragică și adăugarea de infecții bacteriene.
La administrarea ribavirinei, pot fi observate ușoare dispepsii tranzitorii, anemie hemolitică, concentrație crescută de acid uric și dureri de cap.
Tratamentul se efectuează sub supravegherea specialiștilor.

HCV Direct Effects

În 2013, un nou medicament, dezvoltat în ultimii 11 ani, a trecut prin studii clinice și a fost aprobat ca agent antiviral cu acțiune directă. Sofosbuvir fabricat de Gilead (SUA) este brevetat ca singura substanță activă în prezent, potrivit cercetărilor, care vindecă hepatita C în 95% din cazuri.
Datorită costului ridicat al producției (cursul de bază al tratamentului cu sofosbuvir din Statele Unite costă 84.000 de dolari), compania a transferat drepturile de licență pentru producerea medicamentului. În prezent, Hepcinat, fabricat în India, este prezent și pe piața medicamentelor cu costul medicamentelor pentru un curs de terapie de 880-1200 dolari SUA.
Medicamentul antiviral conține o combinație de sofosbuvir și daclatasvir, administrată pe cale orală. Doza și durata cursului sunt calculate de către hepatolog pe baza informațiilor despre genotipul viral, stadiul fibrozei hepatice și caracteristicile individuale ale pacientului. Medicamentele sunt eficiente pentru toate genotipurile VHC, nu au contraindicații pentru pacienții infectați cu HIV. Cursul de tratament este de la 12 la 24 de săptămâni.

Hepatoprotectori pentru hepatita C

Hepatoprotectorii, care fac parte din terapia pentru hepatita C, au ca scop menținerea funcțiilor organului afectat. Nu vindecă corpul bolii, ele ajută la menținerea și restabilirea sănătății ficatului, regenerarea țesutului.
Astfel de medicamente eficiente pentru hepatita C includ Essentiale, Karsil, acid lipoic, Silimar, Phosphogliv și altele. Cursul de administrare a hepatoprotectorilor începe indiferent de prezența sau absența terapiei antivirale și se termină cu sănătatea clinică a ficatului, confirmată prin teste de laborator și studii instrumentale.

imunomodulatori

Deoarece sistemul imunitar suferă de o încărcătură virală constantă, utilizarea medicamentelor care au ca scop întărirea acestuia este inclusă în terapia generală prescrisă pentru pacienții cu hepatită C. Cele mai frecvente imunomodulatoare pentru hepatita C sunt Zadaksin și Temogen.

Dieta alimentară

Tratamentul hepatitei C și complicațiilor sale este însoțit de numirea unui sistem terapeutic de nutriție Pevzner, dieta nr. 5. Dietingul ajută la facilitarea funcționării ficatului și a altor organe ale sistemului digestiv, încetinind dezvoltarea complicațiilor hepatitei C.
Principiile de baza ale dietei nr. 5 limiteaza consumul de alimente care sporesc secretia de sucuri digestive: grasimi, picante, sarate, afumate, conserve, cafea, ceai puternic. Băuturile alcoolice sunt complet excluse. Volumul zilnic recomandat de lichide (apă, compot, băuturi fructe, sucuri de fructe și legume cu un efect iritant scăzut asupra stomacului) variază de la 2 la 3 litri.

Predicția rezultatelor tratamentului pentru hepatita C

Prognosticul pentru vindecarea hepatitei virale C depinde de momentul inițierii tratamentului, stadiul bolii, prezența și gradul de dezvoltare a complicațiilor, alegerea cursului tratamentului și numirea unui specialist.
Prognozele cele mai favorabile la începutul tratamentului la o etapă timpurie, acută de hepatită C, când boala nu a trecut încă într-o infecție cronică cu complicații severe, degenerarea celulelor hepatice, daune toxice organismului.
Respectarea principiilor nutriției dietetice, refuzul alcoolului contribuie foarte mult la evitarea dezvoltării timpurii a complicațiilor și, în general, la menținerea sănătății.
În funcție de alegerea medicamentelor cu acțiune antivirală directă sau generală, prognosticul pentru hepatita virală C este de 45 până la 95% din curabilitatea sa. Tratamentul general al hepatitei C cu utilizarea de noi medicamente antivirale ajută la vindecarea bolii și evitarea complicațiilor.

Prevenirea hepatitei C

Foto: Alexander Raths / Shutterstock.com

Din cauza numărului mare de genotipuri de tip hepatită și capacitatea sa de a evolua, crearea a numeroase subspecii specifice de prevenire a hepatitei C, sub formă de vaccinare este încă în curs de dezvoltare. Măsurile nespecifice de prevenire a bolii cu hepatita virală C sunt considerate măsuri restrictive pentru a proteja împotriva penetrării virusului în organism și pentru întărirea generală a corpului.
Hepatita C se transmite exclusiv atunci când fluidul biologic care conține virusul vine în contact cu suprafața plăgii sau cu țesuturile subcutanate. Prin urmare, prevenirea bolii este excluderea situațiilor de astfel de contacte:

  • monitorizarea respectării standardelor de sănătate și siguranță atunci când se utilizează facilități medicale, cosmetice, saloane dentare, eliminând posibilitatea de a folosi instrumente chirurgicale sterilizate non, seringi de unică folosință;
  • limitarea numărului de contacte sexuale cu parteneri necunoscuți, utilizarea echipamentului individual de protecție în timpul actului sexual;
  • analiza periodică a markerilor de virus atunci când lucrează în condiții de risc crescut de infecție.

Aproximativ 20% dintre cazurile de infecție cu virusul hepatitei cu această formă au o etiologie neclară, boala apare la persoanele care duc un stil de viață sănătos, nu au suferit proceduri de transfuzie sanguină sau transplanturi de organe care au un partener sexual permanent și nu sunt predispuși la dependența de droguri injectabile. Prevenirea este o măsură pentru a preveni o boală care trebuie urmată chiar și în absența unei șanse clare de infecție.
Alte măsuri includ prevenirea modului sănătos de viață non-specifice, să limiteze consumul de alcool, regimul alimentar echilibrat, care ar putea împiedica dezvoltarea bolii si a complicatiilor sale, chiar și atunci când virusul intră în organism.

Hepatita C: măsuri preventive în prezența unui pacient în familie

Hepatita C este o boală infecțioasă care este transmisă în principal prin sânge. Când locuiți împreună în același spațiu cu un pacient infectat, nu este nevoie să protejați camera, să opriți contactul tactil sau să folosiți tacâmuri separate.
Este important să excludeți împărțirea unei cuțite de ras (din cauza posibilelor tăieturi), o periuță de dinți, pentru a dezinfecta suprafețele pe care picăturile de sânge cauzate de rănirea gospodăriei, soluția de albire (1: 100), lichidele care conțin clor, fierberea sau spălarea la 60 ° C masuri de protectie in timpul actului sexual, pentru prevenirea leziunilor genitalelor, dezvoltarea de boli care implica deteriorarea pielii sau membranelor mucoase. În prezența rănilor, a rănilor deschise, se recomandă prudență.
Datorită rezistenței scăzute a organismului la alte tipuri de hepatită, vaccinarea împotriva hepatitei A și B este recomandată membrilor de familie și îngrijitorilor.

Prevenirea infectării fătului și nou-născutului

Datorită simptomelor șterse, prezența hepatitei virale C la o femeie poate fi diagnosticată deja în stadiul de sarcină la evaluarea testelor de infecție. În astfel de cazuri, prognosticul transmiterii virusului la făt depinde de încărcătura virală a corpului mamei, determinată de numărul de titruri din sânge.
Pentru a reduce probabilitatea de infectare a fătului, se recomandă administrarea unor medicamente cu efect general, precum și numirea hepatoprotectorilor pentru a reduce probabilitatea complicațiilor de sarcină cauzate de creșterea stresului asupra ficatului.
Cu o sarcină virală scăzută, probabilitatea de a avea un copil infectat este mică, deși este posibil să se determine prezența unui virus în sânge numai la 1-1,5 ani după naștere, deoarece anticorpii mamei sunt în sângele bebelușului pentru o lungă perioadă de timp.
O prevenire completă este un test de sânge pentru prezența unui virus înainte de concepție și un curs de tratament pentru o boală dacă este prezentă înainte de sarcină. În timpul perioadei de gestație, medicamentele antivirale sunt interzise de utilizare datorită posibilelor efecte teratogene asupra fătului și cresc riscul de avort spontan.
Pentru a reduce probabilitatea de infectare a nou-născutului, se recomandă aceleași măsuri ca și pentru a trăi cu o persoană infectată adultă.
Alăptarea de către o mamă cu hepatită C este în prezent recunoscută ca fiind sigură, deoarece nu există virus în laptele matern. Cu toate acestea, este necesar să se monitorizeze cu atenție starea pielii la nivelul sânilor și mameloanelor, prevenind greața, fisurile, precum și verificarea mucoasei bucale a bebelușului pentru răni, abraziuni și infecții fungice.
Atunci când microtraumurile apar în zona mamelonului, se recomandă utilizarea mucoasei pentru a împiedica bebelușul să sufere o rană de pe rană în gură sau pentru a opri temporar alăptarea până când pielea se recuperează.

Diagnosticul de laborator al hepatitei C

MI Mikhailov, Institutul de Epidemiologie și Microbiologie. N.F. Gamalei RAMS, Moscova

Atunci când faceți un diagnostic de "hepatită C", trebuie luați în considerare următorii factori importanți:

  • indicatorii de activitate ai enzimelor "hepatice";
  • prezența sau absența markerilor infecției cu virusul hepatitei C (VHC) și a altor virusuri hepatotropice;
  • date de istorie epidemiologică;
  • rezultatele examinării clinice a pacientului. Numai o contabilitate cuprinzătoare a acestor factori face posibilă diagnosticarea acestei boli cu un grad ridicat de fiabilitate. Lucrătorul de laborator trebuie să furnizeze informații obiective despre spectrul identificat de antigeni virali și anticorpi, precum și ARN-ul HCV, permițând clinicianului, unui operator de transfuzie sanguină și epidemiologului să-și rezolve problemele. Cel mai adesea este:
  • identificarea persoanelor cu VHC pentru a reduce nivelul hepatitei C post-transfuzie;
  • diagnosticul și distincția între hepatita C acută și cronică;
  • prognosticul bolii;
  • numirea, evaluarea și prognosticul eficacității terapiei;
  • studiind amploarea răspândirii VHC într-o populație și diferite grupuri ale populației.
    În acest caz, principalele domenii de lucru efectuate de personalul laboratorului sunt:
  • dezvoltarea și selectarea celor mai informative metode de identificare a markerilor infecției cu VHC;
  • determinarea criteriilor pentru o evaluare obiectivă a rezultatelor obținute;
  • dezvoltarea algoritmilor optime de cercetare în laborator;
  • implementarea unui sistem de îmbunătățire a calității detectării markerilor infecției cu VHC.

    Baza de diagnosticare a hepatitei C este cunoașterea VHC, replicarea acestuia, informații despre dinamica apariției și dispariției markerilor infecției, precum și metodele moderne imunochemice și biologice moleculare pentru detectarea antigenilor, a anticorpilor și a acizilor nucleici.

    Virusul hepatitei C. HCV a fost identificat pentru prima dată în 1988, când un grup de cercetători condus de M. Houghton și Choo Q.L a aplicat noi metode de cercetare moleculară biologică, clonând și secvențându-se genomului virusului [I]. O particulă de virus hepatitic C are o formă sferică cu un diametru mediu de aproximativ 50 nm [2,3]. Încă de la descoperirea virusului s-au făcut încercări de a detecta și de a studia structura virusului hepatitei C, dar încă nu există rezultate bine documentate ale acestor studii, care ar putea fi datorate dificultății de acumulare a particulelor de virus în cantitățile necesare.

    VGS este singurul membru al genului Hepacivirus din familia Flaviviridae, care include viruși precum virusul diareei de taur și porcine (genul Pestivirus) și virusul febrei galbene, virusul Denge și GB: GBV-A, GBV-B și GBV-C / HGV (genul Flavivi-rus). Structura virusului hepatitei C poate fi reprezentată după cum urmează (schema nr. 1). Nucleocapsidul conține ARN-ul virusului hepatitei C. De mai sus, nucleocapsidul este acoperit cu o membrană lipidică cu proteine ​​învelite în el învelite, codificate de ARN-ul HCV. Genomul viral este reprezentat de o moleculă ARN liniară monocatenară cu polaritate pozitivă, cu o lungime de aproximativ 9.600 nucleotide. Organizarea genomului VHC este similară cu alte flavivirusuri. Se disting două zone care codifică proteine ​​structurale și non-structurale (funcționale). Genele care codifică proteine ​​structurale sunt localizate în regiunea 5 'a genomului viral și ne-structurale în regiunile 3'. Gena HCV are un cadru deschis de citire (ORS), o singură polipeptidă (aproximativ 3000 de aminoacizi), care este tăiată în proteine ​​structurale și nestructurale de proteaze virale și celulare.

    Fig. 1. Elemente structurale ale VHC

    Proteinele structurale includ proteine ​​codificate de zonele nucleului AR, E1 și E2 ale ARN-ului HCV. Au fost detectate trei forme de proteină C de HCV: lungime întreagă (p21) cu greutate moleculară de 21 kD, trunchiată (p19) și formă (p16) găsită în nucleolii hepatocitelor infectate. Pe suprafața sa, proteina C poartă diverse epitopi de celule B foarte conservate, a căror existență este extrem de importantă pentru detectarea anticorpilor la HCV în procesul de diagnosticare a hepatitei C.

    Zonele ARN HCV E1 și E2 codifică proteinele cu o greutate moleculară de 31 și 70 kD. Aceste proteine ​​au câteva situsuri de N-glicozilare; în proteina E1 sunt definite până la 6 astfel de situri și în E2-11. În secțiunea E2 există informații despre o proteină mică - p7, care nu se găsește în structura virusului.

    Desemnarea regiunilor situate mai aproape de capătul 3 'al ARN-ului HCV - ca zone care conțin informații despre proteinele nestructurale ale virusului, indică faptul că aceste proteine ​​nu sunt componente structurale ale particulelor virale. În zona nonstructurală a ARN VHC, există secțiuni desemnate ca: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A și NS5B. Majoritatea proteinelor codificate de zone nonstructurale ale ARN-ului HCV sunt necesare pentru replicarea virusului.

    O analiză comparativă a secvențelor nucleotidice ale ARN ale izolatelor HCV obținute în diferite regiuni ale lumii și chiar și în cursul bolii de la același pacient a dezvăluit caracteristica principală a acestui virus - o heterogenitate ridicată a ARN. Poziția variabilității genetice semnificative a ARN-ului VHC a constituit baza teoriilor care explică: transportul pe termen lung (uneori pe tot parcursul vieții) a virusului, dezvoltarea frecventă a unei boli cronice, dificultăți în terapie și crearea de vaccinuri eficiente. Cele mai semnificative diferențe în secvențele ARN-ului VHC sunt concentrate în partea N-terminală a regiunii E2, care este desemnată drept "regiunea hipervariabilă" (HVR) [4].

    În prezent, au fost identificate 6 genotipuri majore și peste 100 de subtipuri de HCV. Genotipurile 1a, 1b, 2a, 2b, 2c și Za reprezintă mai mult de 90% din izolatele VHC obținute în America de Nord și de Sud, Europa, Rusia, China, Japonia și Australia / Noua Zeelandă [5]. Genotipurile 4, 5a și respectiv 6 sunt înregistrate în Africa Centrală și de Sud și în Asia de Sud-Est. În Rusia și țările CSI, predominanța genotipului 16 este înregistrată (nu mai puțin de 68,9%) [6,7]. Se crede că pacienții infectați cu genotipul 1 (în special 1c) răspund mai rău la tratament decât pacienții infectați cu alte genotipuri ale virusului.

    La un pacient, HCV circulă ca o populație de particule virale în care genomul diferă între ele cu 1-2% (de cvasi-specificitate) ca urmare a mutațiilor care se acumulează în timpul infecției și / sau au intrat în corpul pacientului în timpul infecției. Aceste forme mutante pot contribui la o replicare mai activă sau pot ajuta virusul să evite răspunsul imun al organismului și pot afecta rezultatul infecției acute, diferențele în cursul bolii și răspunsul la terapia cu interferon [8].

    DEFINIȚIA ANTI-VHC. După descoperirea virusului HCV și determinarea rolului acestuia în dezvoltarea hepatitei post-transfuzie - "nici A și B", cercetătorii au fost însărcinați să dezvolte metode capabile să detecteze persoanele cu VHC și adecvate pentru diagnosticarea hepatitei cronice acute și cronice. S-a constatat că antigene VHC circulă extrem de scăzute și este evident că nivelul metodologic al anilor 80 ai secolului XX, utilizat pentru detectarea antigenilor virali, a fost în mod clar insuficient.

    În 1989, un grup de cercetători de la Chiron Corporation, sub conducerea lui Q-L.Choo, a donat ARN HCV și a obținut oligopeptide imunoreactive care reacționează cu anticorpi care circulă în sângele pacienților cu hepatită cronică "nici A și nici B". Aceste oligopeptide au devenit baza medicamentelor de diagnosticare pentru detectarea anticorpilor la HCV. Acest lucru a determinat progresul rapid în dezvoltarea și producția comercială a produselor de diagnosticare. Principala metodă utilizată pentru detectarea anti-HCV a devenit testul imunosorbant legat de enzimă, ca metodă care îndeplinește cerințele asistenței medicale practice - adică. Are o mare sensibilitate, specificitate și ușurință în implementare.

    Având în vedere că VHC persistă în sângele pacienților cu hepatită cronică acută și cronică C concomitent cu anti-HCV, atenția dezvoltatorilor de medicamente pentru diagnosticare sa concentrat asupra dezvoltării sistemelor de testare pentru detectarea anticorpilor care asigură cea mai completă detectare a purtătorilor virusului și cel mai scurt diagnostic posibil de infecție acută. Varietatea antigenelor și determinanților antigenici codificați de zona structurală și nestructurală a ARN-ului VHC a determinat direcția în proiectarea produselor de diagnostic prin selectarea și aranjarea oligopeptidelor utilizate pentru a le crea. În timpul scurs de la descoperirea VHC, s-au creat sisteme de diagnosticare de trei generații (Tabelul 1).

    Tabelul 1
    Preparate de diagnosticare pentru detectarea anti-HCV [9]

    Peptide utilizate
    zone ale ARN VHC în care
    ele sunt codificate

    Detectarea transportatorului%
    HCV

    Prima dată
    detectare
    anti-HCV de la
    începeți icterul

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 și NS4
    SZZs NS3
    De la 100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 și NS4
    SZZs NS3
    Peptida NS5

    Introducerea de peptide suplimentare, în special c22-3 (Core), în preparatele de diagnostic din generația a II-a și a treia generație a permis rezolvarea problemei principale, adică creșterea sensibilității, specificității și, cel mai important, detectabilitatea anti-HCV. Datorită diagnosticării din a treia generație, pot fi detectate până la 97% din purtătorii HCV. În același timp, o anumită discuție a fost provocată de decizia de a introduce în peptida de diagnosticare codificată de regiunea NS5 a ARN-ului HCV. Conform unor cercetători, prezența acestei peptide nu este critică pentru îmbunătățirea calității unui medicament de diagnosticare. [10,11]. Cu toate acestea, anticorpii la NS5 pot fi detectați mai devreme în infecție, ceea ce îmbunătățește calitatea diagnosticului de laborator de hepatită acută C. [12].

    În prezent, în întreaga lume, inclusiv în Rusia, se utilizează produse de diagnostic de generația a treia. Peptidele utilizate în preparatele de diagnostic au fost obținute utilizând tehnologia recombinantă (de exemplu, testele de diagnosticare ale întreprinderilor: preparate de diagnosticare, Nizhny Novgorod, Vector, Novosibirsk, Roche, Abbott etc.) 000 MTS "Avicenna", Sankt Petersburg, "Organon", etc.). Situsurile de diagnostic, în care ambele tipuri de peptide au fost utilizate simultan, au fost desemnate ca medicamente de generația a patra. Conform caracteristicilor lor, aceste medicamente nu au diferențe semnificative. Testele comparative efectuate în mod regulat de către Ministerul Sănătății din Rusia au demonstrat sensibilitatea comparabilă a produselor de diagnosticare ale producătorilor autohtoni și străini.

    Sa stabilit că utilizarea diagnosticului de generația a treia pentru detectarea anti-HCV în rândul populației imunocompetente (de exemplu, donatori de sânge) este estimată la 98,8-100%. În același timp, printre indivizii imunocompromiși, cum ar fi pacienții după transplantul unui rinichi, măduvă osoasă sau persoane infectate cu HIV, această cifră este semnificativ mai mică - 50 - 95% [12]. S.George și colab. [13] au demonstrat că la 8,4% dintre pacienții cu infecție HIV se înregistrează rezultate fals-negative ale detectării anti-HCV. Mai mult, la acești pacienți, un efect de seroreversiune poate fi înregistrat în timpul observării, adică înregistrarea unui rezultat pozitiv după o perioadă seronegativă anti-VHC [14].

    Una dintre cele mai importante probleme în efectuarea cercetării pentru prezența anti-HCV este rezultatul fals pozitiv. Aspectul lor se poate datora interacțiunii nespecifice a componentelor reacției, posibilele reacții încrucișate cu alte antigene virale și mulți alți factori. Nivelul rezultatelor false-pozitive în detectarea anti-HCV cu diferite medicamente de diagnostic poate ajunge la 10-20% [15,16]. Un nivel crescut al acestor rezultate a fost observat la pacienții cu boli oncologice și autoimune, la persoanele cu starea de imunodeficiență și la pacienții cu sifilis [16,17]. Existența unor rezultate fals pozitive îi confruntă pe lucrătorul de laborator cu sarcina de a le diferenția de adevărata detectare a anti-HCV. Pentru a rezolva această problemă este detectarea ARN HCV seric într-o probă de sânge. Cu toate acestea, rezultatul negativ al detectării ARN-ului HCV nu sugerează prezența unei detecții false pozitive a anti-HCV. Trebuie reținut faptul că anti-HCV poate circula izolat în sângele unui pacient care sa recuperat din hepatita acută C (10-15%) sau care a eliminat ARN VHC ca rezultat al terapiei.

    CONFIRMARE (SUPLIMENTARE) ÎNCERCĂRI. Au fost elaborate teste suplimentare (suplimentare) pentru a face distincția între probele false pozitive și probele care conțin efectiv anticorpi împotriva VHC. Cel mai adesea în aceste teste se folosește principiul imunoblotului [de exemplu, testul RIBA ("Ortho-Clinical Diagnostics"); "LiaTek HCV" (Organon Teknika)] ​​atunci când antigeni codificați de diferite zone ale ARN-ului VHC sunt adsorbiți pe o membrană de nitroceluloză pe o membrană de nitroceluloză. Anti-HCV interacționează cu antigeni adsorbiți utilizând anticorpi marcați cu enzime împotriva IgG umană și detectarea lor ulterioară folosind un complex de substrat. În plus față de imunoblot, preparatele diagnostice pentru detectarea anti-HCV împotriva antigenelor specifice codificate de diferite zone ale ARN-ului HCV sunt de asemenea utilizate ca teste suplimentare ("Spectrum 4" - Imbio, Nizhny Novgorod, RecombiBest ANTI-HCV-SPECTR) Best ", Novosibirsk; ELISA-Anti-NSU-Spectr, NPO" Sisteme de diagnosticare ", Nižni Novgorod].

    Dezvoltarea și implementarea acestor teste merge mână în mână cu introducerea testelor de screening pentru a detecta anti-HCV, repetând principiul spectrului extins de peptide utilizate în fiecare generație ulterioară de produse de diagnoză. Astfel, diagnosticul RIBA-III diferă de generația anterioară prin adăugarea unei peptide codificate de zona NS5. Principiile de confirmare a detectării pozitive a anti-HCV includ în primul rând: posibilitatea (în unele cazuri) de a obține rezultate mai precise ale reacției enzimatice atunci când interacționează cu peptide individuale, precum și utilizarea unui spectru extins de peptide în diagnosticare care nu sunt utilizate în testele de screening. Numai introducerea peptidelor noi poate crește valoarea diagnosticului testelor de confirmare.

    Interpretarea rezultatelor obținute, de exemplu, într-un test precum RIBA-III, include trei răspunsuri posibile: un rezultat pozitiv, negativ și incert. Ultimul dintre ele se eliberează în cazul absenței indicațiilor clare (conform instrucțiunilor atașate la kitul de diagnoză), permițându-vă să judecați cu certitudine prezența sau absența anti-HCV în proba studiată. Raportul spectrului de răspunsuri înregistrate la efectuarea testelor de confirmare variază în funcție de caracteristicile grupurilor de pacienți la care anti-VHC este detectat în principal [18]. Potrivit J.M. Pawlotsky și colab. [19], în jumătate din rezultatele tratate ca "nespecificate", este posibil să se detecteze ARN-ul HCV. În opinia noastră, legitimitatea răspunsului - "rezultatul incert al detectării anti-HCV", eliberat de un lucrător de laborator unui clinician, este evident nu numai atunci când se efectuează un test de confirmare, dar și se testează în mod curent pentru prezența anti-HCV. Nevoia de interpretare a rezultatelor este o reflectare a stării actuale a diagnosticului de hepatită C.

    DETERMINAREA ANTI-VHC IgM. În prezent, au fost create kituri de diagnosticare pentru detectarea IgM anti-HCV de către companii și sunt produse comercial: "Vector Best"; "Sisteme de diagnosticare"; Imbio, Abbott și alții. La etapa de proiectare a kiturilor de diagnostic, s-au creat kituri ELISA, pe baza peptidelor codificate de diferite regiuni ale ARN-ului HCV [20]. Alegerea a fost făcută pe o peptidă codificată de regiunea de bază a ARN-ului HCV și detectarea anticorpilor IgM la acesta. Ca și în cazul utilizării testelor pentru detectarea anti-HCV (IgG), rezultatele false pozitive pot fi înregistrate în testul IgM anti-HCV. Potrivit lui Stevensona D.L. et al. [21], până la 70% dintre pacienții cu hepatită cronică C cu prezența simultană a IgM anti-HCV au avut un nivel crescut de factor reumatoid, ceea ce contribuie la apariția unor rezultate false pozitive. Cu toate acestea, în conformitate cu Pawlotsky J.M., prezența factorului reumatoid nu afectează calitatea detectării IgM anti-HCV [22].

    DETERMINAREA ANTIGENELOR VHC. Capacitatea de a detecta antigeni VHC a atras atenția cercetătorilor imediat după descoperirea virusului. Principala posibilitate de testare a acestora a fost demonstrată de către K. Krawczynski și colaboratorii [23], care au detectat imunohistochimic antigeni HCV în țesutul hepatic, dovedind specificitatea strălucirii imunofluorescente. Utilizarea anticorpilor poli- și monoclonali la diferite antigene VHC a evidențiat prezența antigenilor HCV de bază, antigeni codificați de zonele NS3 și NS4 ale ARN-ului HCV în nucleul hepatocitelor și citoplasmă la 60-90% dintre pacienții cu HS cronică) [24]. Antigenii HCV pot fi detectați în mai puțin de 5% din celulele hepatice.

    Primele sisteme de diagnosticare pentru detectarea antigenului HCV au apărut pe piața preparatelor imunobiologice în anul 1999 ("Sistemul de testare EL1SA pentru anticorpul de bază pentru anticorpul martor (monoclonal murinal)" și "Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai"). Ținta pentru detectare a fost antigenul principal al HCV, care este determinat utilizând o varianta ELISA de fază solidă proiectată pe baza anticorpilor monoclonali. Primele studii privind utilizarea acestor teste au determinat sensibilitatea, specificitatea și perspectivele lor înalte, în special în serviciul de transfuzie sanguină [25,26]. stabilit:

  • capacitatea de a determina Core Ag HCV în ser sau plasmă;
  • specificitatea detecției de HCV Core Ag;
  • prezența persoanelor cu antigen circulant în sânge seronegativ pentru anti-VHC;
  • detectarea frecventă (90,3%) a HCV Core Ag în ser cu prezența ARN anti-HCV și HCV [25];
  • corelația directă între concentrația de ARN VHC și detectarea Ag HCV Core [25];
  • contracția fazei "fereastră" - de la momentul infectării până la primul rezultat pozitiv al detectării anti-HCV. Sa constatat că în ziua următoare, după prima detectare a ARN-ului VHC [26] și lung (26 zile în medie), înainte de apariția anti-HCV [27], a fost detectat ca Agregarea HCV Core Aging în 83% din cazuri (n = 24).

    METODE DE DETECTARE A ARN VHC. Stadiul modern al diagnosticului de laborator al hepatitei C poate fi caracterizat ca etapa incipientă a utilizării pe scară largă a metodelor biologice moleculare pentru detectarea ARN-ului VHC. Marea majoritate a metodelor de detectare a acidului nucleic au fost testate pentru a detecta ARN-ul HCV. O cantitate semnificativă de recenzii de literatură publicate atât în ​​publicațiile rusești [28], cât și în publicațiile străine [29] sunt dedicate principiilor de proiectare a produselor de diagnostic și a utilizării acestora pentru detectarea ADN sau ARN viral. Toate aceste metode pot fi împărțite în două grupuri, care se bazează pe aplicarea principiilor de hibridizare fără amplificarea secțiunii alese de acid nucleic sau cu amplificarea lor, care poate crește semnificativ rezoluția metodei.

    Metoda de hibridizare se bazează pe combinația de sonde de hibridizare marcate (inginerie genetică sau structuri moleculare sintetice conținând secvențe de nucleotide care sunt complementare la secțiunile selectate ale ARN). Analiza rezultatelor se efectuează în funcție de intensitatea semnalului provenit de la etichetă în compoziția complexului format.

    În hepatita C, această metodă de detectare a ARN-ului VHC a fost utilizată în primul rând pentru a fi identificată direct în hepatocite și în testele denumite "hibidizare in situ" [30]. Posibilitatea detectării directe a ARN-ului HCV în țesut a făcut posibilă detectarea acestuia în celulele sanguine mononucleare, celulele glandelor salivare și alte țesuturi ale corpului unui pacient cu hepatită C [31,32].

    Metoda de hibridizare utilizată pentru detectarea ARN-ului HCV face posibilă demonstrarea prezenței lanțurilor negative (replicative) ale ARN-ului HCV, ceea ce indică o replicare activă a virusului [33].

    Metoda reacției în lanț a polimerazei este în prezent cea mai răspândită tehnică metodică care stă la baza aproape tuturor metodelor biologice moleculare pentru detectarea ARN-ului HCV. Mai mult, determinarea ARN-ului HCV este posibilă atât în ​​formă calitativă cât și cantitativă, ceea ce este deosebit de important pentru numirea, monitorizarea și evaluarea eficacității terapiei aplicate.

    Principalele variante ale metodei sunt:

  • reacția în lanț a polimerazei (PCR);
  • reacția în lanț al ligazei;
  • NASBA;
  • TMA (reacție de amplificare mediată de transcriere, amplificare mediată de transcripție).

    Reacția în lanț a reacției polimerazice este o metodă largă de detectare a ARN-ului HCV, atât în ​​Rusia, cât și în străinătate. Se bazează pe un proces cu mai multe cicluri, asemănător replicării naturale a acidului nucleic, fiecare ciclu constând din etape succesive.

    Din materialul studiat (plasma serică sau sanguină, biopsie hepatică), ARN VHC este izolat. Având în vedere că acidul nucleic HCV este reprezentat de ARN și că pentru amplificare este necesară o moleculă de ADNc, folosind transcriptaza reversă a enzimei, apare formarea moleculelor de ADNc HCV cu o singură catenă. În etapa următoare, așa-numitele "HCV" sunt atașate la o secțiune specifică a fiecăruia dintre lanțurile cADN ale HCV primerii sunt oligonucleotide scurte complementare secvențelor nucleotidice cunoscute. Comparația structurii primare a regiunii 5'UTR a genomului izolatelor HCV diferite a relevat variabilitatea lor nesemnificativă (între genotipuri, homologie nucleotidică - 92-98%, și în genotipul 98-99%). Acest lucru a făcut ca preferința să se aleagă primeri din această zonă a ARN-ului VHC și utilizarea lor în sistemele de testare a diagnosticului produse în țara noastră și în străinătate.

    Mai mult, cu ajutorul ADN-polimerazei ADN dependentă de ADN-ul enzimatic, apare sinteza de noi segmente de ADN. În prezent, bacteriile Thermophilus termus (Tth polimeraza) sau Thermophilus aquaticus (Taq polimeraza) sunt utilizate cel mai frecvent ca sursă a acestei enzime. Dispunând de stabilitate termică în prezența ionilor de mangan și magneziu, această enzimă poate fi utilizată simultan pentru a sintetiza molecule complementare monocatenare HCV cADN și pentru a amplifica regiunile cADN selectate. În stadiul final al unui ciclu al reacției, folosind ADN polimeraza, are loc o sinteză a unor noi fire de ADNc HCV complementare. Repetarea multiplă a ciclurilor de reacție conduce la acumularea de fragmente cADN ale HCV, care pot fi înregistrate utilizând electroforeza pe gel de poliacrilamidă urmată de detectarea vizuală sau folosind hibridizarea cu sonde oligonucleotidice, ceea ce mărește sensibilitatea și specificitatea produselor de diagnostic utilizate. Utilizarea primerilor etichetați cu enzime permite înregistrarea rezultatelor PCR utilizând imunoteste enzimatice.

    Un obiectiv constant pentru cercetătorii care proiectează sisteme de diagnosticare pentru detectarea ARN VHC este creșterea sensibilității și a specificității. Acest obiectiv este servit de o varianta PCR, denumita "PCR nested" (PCR imbricata) [34]. O caracteristică distinctivă a acestei metode din "clasic" este utilizarea simultană a două perechi de primeri, dintre care unul este complementar porțiunii interne a ampliconului obținut după prima rundă de amplificare. În același timp, se crede că cu această variantă PCR există un risc mai mare de contaminare a probelor, ceea ce poate duce la rezultate fals pozitive [35].

    Nevoia acută de determinare a ARN-ului VHC și dificultățile asociate producției la scară largă a kiturilor de diagnostic extrem de sensibile și specifice pentru diagnosticarea PCR au determinat utilizarea pe scară largă a preparatelor realizate în laboratoare științifice. Comparația acestor sisteme de testare, așa-numitele teste "home" ("teste interne"), a demonstrat variația lor ridicată în sensibilitate și specificitate, precum și lipsa de reproductibilitate a rezultatelor între laboratoare și o serie de produse de diagnosticare. Astfel, la efectuarea primului ciclu european de control al calității "extern" pentru detectarea ARN-ului HCV (1996) de la 136 de laboratoare, doar 22 (16%) au putut determina corect prezența sau absența ARN viral în probele de control furnizate [36]. Un rezultat similar a fost remarcat în țara noastră, în timpul unei lucrări similare în cadrul sistemului federal de control al calității (2001), când din cele 14 laboratoare participante, doar 3 (21,4%) au reușit să rezolve corect sarcina [37].

    Motivele pentru apariția rezultatelor false-negative și false-pozitive ale detectării ARN-ului VHC sunt diverse. Pentru rezultate negative false:
    - pierderea sau distrugerea ARN VHC în pregătirea pentru răspunsul materialului clinic;
    - prezența în proba a inhibitorilor care afectează diferitele componente ale PCR. Acești inhibitori sunt reprezentați de diferite substanțe chimice sau proteice. De exemplu: prezența inhibitorilor de revers transcriptază în lichidul spermatozoid nu a permis detectarea ARN-ului HCV și vorbește despre posibilitatea realizării transmiterii sexuale a hepatitei C [38]; prezența hepaprinei [39]; niveluri crescute de crioglobulină serică [40];
    - neconformitatea cu depozitarea termică și transportul materialelor clinice. Pentru rezultate fals pozitive:
    - contaminarea între eșantioane (atunci când se prelucrează probe și / sau se lucrează cu amestecul de reacție), inclusiv contaminarea cu un eșantion de control pozitiv;
    - contaminarea cu produse de pre-amplificare (ampliconi) care pot contamina probele și soluțiile testate prin aerosoli sau echipamente de laborator.

    Introducerea masivă a diagnosticului PCR prin definirea ARNV al VHC a stabilit sarcina de tranziție la un nou nivel de cercetare de laborator pentru autoritățile de îngrijire a sănătății. Izolarea zonelor izolate pentru punerea în aplicare a etapelor principale ale PCR (pentru pregătirea probei, amplificarea, pentru a ține seama de rezultatele obținute); un kit separat pentru fiecare etapă a hainelor de laborator de reacție, pipete automate; existența kiturilor standard de diagnosticare și, cel mai important, prezența unui personal de înaltă calificare a laboratorului, reduce apariția unor rezultate false.

    Primul kit standardizat pentru determinarea ARN HCV ("AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostic Systems") a fost fabricat în 1993. De-a lungul anilor, s-au dezvoltat truse de ARN VHC, scopul principal fiind creșterea sensibilității și specificității acestora. La proiectarea lui Amplicor TM HCV, s-au folosit mai multe metode originale pentru a identifica 100 sau mai multe copii ale ARN-ului VHC pe ml. De asemenea, pentru a face față eventualelor cazuri de contaminare a probelor și a soluțiilor utilizate în kit. Utilizarea enzimei - amperses și trifosfat de deixiuridină (dUTP) face posibilă distrugerea în primul ciclu de amplificare a aplicațiilor anterioare cu care s-ar putea produce contaminarea. Distrugerea amplificării la sfârșitul primului ciclu de amplificare (la +55 ° C) nu permite enzimei să distrugă amplicoanele selectate ca ținte. Inovația principală a fost introducerea controlului intern. Semnificația acestei inovații constă în introducerea unei secvențe similare regiunii amplificate a ARN-ului HCV în fiecare probă de testare, care este detectată ulterior utilizând primerii corespunzători în reacția de amplificare într-un mod similar. Absența unei reacții pozitive în detectarea controlului intern indică prezența unui rezultat fals negativ al reacției la prezența ARN-ului HCV în proba studiată. Următoarea generație a fost diagnosticată cu medicamentul denumit "HCV Amplicor 2.0", care, atunci când este utilizat, are o limită de sensibilitate a 50 molecule de ARN HCV.

    Sistemul de detectare a ARN-ului HCV folosind kiturile Roche nu poate fi luat în considerare în mod separat de instrumentele lor, ceea ce determină calitatea ridicată a testelor. Dezvoltatorii metodei au căutat să automatizeze complet toate etapele reacției. Varianta acestei idei a fost sistemul "COBASAmpliPrepTM", care vă permite să automatizați complet procesul de izolare a ARN-ului VHC, amplificare și detectare, reducând astfel riscul de rezultate fals pozitive și false-negative, menținând în același timp o sensibilitate și o specificitate ridicată [41].

    Reacția în lanț a ligazei pentru detectarea ARN HHC (LCR). Metoda se bazează pe capacitatea enzimei "ADN ligand ADN dependent" de a coase (lega) rupturile legăturii fosfodiesterice în ADN în prezența ionilor ATP și Mg2 +. Ca și în cazul PCR "clasic" pentru detectarea ARN-ului HCV, prima etapă a LCR este transcripția inversă pentru a produce cADN HCV. Mai mult, ligaza ADN se leagă de două perechi de primeri (complementare zonei 5 'necodificate a ARN-ului HCV), care sunt în continuare amplificate. Detectarea produselor de amplificare LCR se efectuează ținând cont de reacția antigenului-anticorp. Fiecare dintre cele două primeri este marcat cu o haptenă diferită. Primul dintre acestea este capturat de anticorpi adsorbiți pe microparticule. După procedura de spălare utilizând o a doua pereche de anticorpi marcate cu o etichetă fluorescentă, aceștia interacționează selectiv cu haptenul din produsul de amplificare, urmată de o reacție a substratului și numărarea pe un fluorimetru.

    Sensibilitatea acestei metode este de aproximativ 200 de copii ale ARN-ului VHC pe ml, ceea ce permite utilizarea acestuia pentru rezolvarea diferitelor probleme de diagnostic clinic [42]. În prezent, trusele de diagnosticare pentru detectarea ARN-ului HCV bazat pe LCR sunt fabricate de Abbott.

    Amplificarea solului nucleic al acidului nucleic - metoda NASBA pentru detectarea ARN-ului HCV se bazează pe acțiunea simultană a trei enzime: transcriptază reversibilă a mieloblastomului aviar, ARNază aviară și ARN polimerază T7 [43.]. Spre deosebire de RT PCR, prima etapă nu inversează transcripția ARN-ului HCV. Folosind enzimele utilizate, mai mult de 10 (9) copii ale regiunii cADN HCV pot fi obținute în 90 de minute [44]. Posibilitatea de a efectua reacția la temperaturi scăzute (+41 ° C) simplifică foarte mult lucrul și elimină nevoia de echipamente care asigură schimbări ciclice ale temperaturilor ridicate. Înregistrările rezultatelor reacției sunt efectuate utilizând electrochimuluminiscența. În ciuda faptului că NASBA este aproape de RT PCR în sensibilitatea sa, metoda nu este utilizată pe scară largă pentru detectarea ARN-ului VHC. În prezent, se dezvoltă o variantă a metodei care combină principiile NASBA și "Real-time RT PCR".

    Metoda de amplificare mediată prin transcriere (TMA) diferă de PCR și LCR în primul rând pentru că amplifică direct fragmente de ARN HCV și nu cADN HCV. În stadiul inițial al reacției, un primer (Nr. 1) este atașat la ARN-ul HCV și o sinteză a unei copii a moleculei țintă, cADN, utilizând o enzimă (revers transcriptază). Reverse transcriptaza, avand de asemenea si activitatea RNase-H, distruge ARN-ul viral intr-un ARN-cDNA hibrid. Apoi, un al doilea primer este atașat la molecula cADN, urmată de finalizarea ADN dublu catenar utilizând transcriptaza inversă. Cu ajutorul unei alte polimeraze β-ARN a enzimei, ARN-ul este transcris de ADNc, ceea ce duce la formarea a 100 până la 1000 de copii ale ampliconului ARN-ului HCV într-un singur ciclu de reacție. Primerul nr. 2 este atașat la aceste aplicații ARN cu sinteza suplimentară a copiilor cADN și distrugerea moleculei de ARN. Atașarea primerului nr. 1 la ADNc urmată de finalizarea ADN-ului dublu catenar declanșează următorul ciclu de amplificare. Înregistrarea rezultatelor reacției se efectuează pe un lumenometru, deoarece amplificanții ARN rezultați interacționează în mod specific cu sondele ADN marcate cu chemiluminii.

    Ca avantaje ale metodei TMA în detectarea ARN-ului HCV, se remarcă:

  • efectuarea reacției la temperaturi mai scăzute comparativ cu PCR;
  • formarea unui număr mai mare de ampliconi într-un singur ciclu de reacție, care reduce timpul necesar pentru obținerea rezultatului final (30-40 minute) și crește sensibilitatea reacției (50 copii / ml) [45].
  • reducerea riscului de contaminare, deoarece ARN este mai puțin stabil decât ADN.

    Studiile comparative privind detectarea ARN VHC utilizând TMA și alte metode au demonstrat un nivel ridicat de coincidență a rezultatelor [45].

    O combinație a principiilor de hibridizare și amplificare stă la baza metodei de detectare a ARN VHC, desemnată ca "Metoda de hibridizare utilizând sonde ramificate sau analiză ADN-ului marcat (bDNA) [46]. Spre deosebire de PCR, acest test amplifică nu moleculele cADN HCV, ci semnalul. Reacția este efectuată pe plăci cu 96 de godeuri pe care fragmente de ARN HCV din zona netranslatată 5 'și gena miezului ARN HCV sunt adsorbite, datorită legării ulterioare la o moleculă de ADN ramificată sintetică și hibridizare cu o probă marcată cu fosfatază alcalină cu o creștere accentuată a semnalului primit este obținută cu un amplificator și o reacție enzimatică ulterioară. În prezent, pe piața diagnosticului au apărut diagnosticuri de generația a treia (Vaueg 3.0 hepatita C virus RNA), care au sensibilitatea de a detecta 520 UI / ml (2500 copii de ARN VHC).

    DETECTIA CANTITATIVĂ a ARNV VHC. Pentru a evalua concentrația ARN-ului HCV, a folosit versiunea cantitativă PCR. Inițial, concentrația de ARN VHC a fost caracterizată prin valori ordinale, cum ar fi "+", "++" etc., reflectând vizual intensitatea benzilor obținute prin electroforeza produselor de amplificare sau prin metoda diluției finale, adică prin prezența unui rezultat pozitiv în final punctul de titrare. Dificultățile de standardizare a tuturor etapelor PCR nu permit o evaluare obiectivă a concentrației de ARN VHC, ceea ce duce la erori semnificative în interpretarea rezultatelor obținute.

    În prezent, rezultatele studiului sunt exprimate în unități cantitative: numărul de copii ale ARN-ului HCV conținut în 1 ml., În termeni absoluți sau logaritmici (log 10). Pe baza faptului că concentrația ARN-ului VHC detectat reflectă numărul de particule virale, acest indicator este denumit "echivalent viral (eq)", cu adăugarea prefixului k (kilogram, mie) sau M (milioane). O altă modalitate de a exprima cantitatea de particule virale este echivalentele lor în greutate. De exemplu, în grame sau picograme (1 pg corespunde la aproximativ 1 milion de echivalente). Varietatea valorilor utilizate face dificilă interpretarea rezultatelor obținute în diferite laboratoare. Prin urmare, Comitetul Expert al OMS privind standardizarea biologică a produs un "eșantion standard internațional" care conține ARN VHC (serul liofilizat care conține ARN-ul HCV al genotipului 1), concentrația acestuia fiind exprimată în unități internaționale (UI / ml) [47]. Coeficienții specifici vă permit să recalculați indicatorii de concentrație obținuți în unitățile internaționale.

    Aproape toate variantele PCR sunt utilizate pentru a determina concentrația ARN-ului HCV. În acest caz, se impun o serie de cerințe specifice preparatelor de diagnosticare, dintre care cel mai important este linearitatea strictă a rezultatelor, adică o creștere a semnalului reacției înregistrate cu o creștere a concentrației de ARN VHC în proba studiată. Utilizarea standardelor interne cu niveluri diferite de ARN VHC ne permite să evităm multe erori metodologice care pot afecta rezultatul final al reacției [28]. Sensibilitatea diagnosticului aplicat (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCx HCV HCV Testul cantitativ al ARN-ului HCV) face posibilă detectarea ARN-ului HCV începând cu 50 copii pe ml [48,49], ceea ce este deosebit de important pentru prezicerea eficacității terapiei antivirale selectate.

    Real-time PCR (RT PCR în timp real) este una dintre opțiunile cele mai promițătoare pentru o metodă cantitativă de detectare a ARN-ului HCV. Metoda și hardware-ul său sunt dezvoltate în comun de specialiștii de la Roche și Percin Elmer. Principiul metodei este capacitatea de a hidroliza secvențele cADN în direcția 5 '- 3'. Reacția utilizează o probă specială marcată cu două coloranți fluorescenți care au o absorbție similară și maxime de fluorescență. În prezența produselor de amplificare, polimeraza Tag descompune sonda, care împiedică transferul de energie de la o moleculă de colorant la alta și astfel împiedică eliberarea unui cuantum de lumină. Un instrument special înregistrează reacția și modelarea matematică a cineticii fluorescente în fiecare etapă a reacției, care permite obținerea de informații despre concentrația inițială de ARN VHC.

    O caracteristică distinctivă a "PCR în timp real" este capacitatea de a obține informații despre prezența ARN-ului VHC direct în procesul de reacție, ceea ce permite reducerea timpului de analiză în combinație cu sensibilitatea ridicată și liniaritatea rezultatelor [50]. Potrivit lui Tatyana Yashina și co-autori, această metodă poate detecta 200 de copii ale ARN-ului VHC pe ml. [51].

    METODE DE GENOTIPARE A ARN VHC. Definirea VHC aparținând unui anumit genotip și subtip a fost aplicată pentru a rezolva nu numai aspecte pur științifice, ci și aspecte practice. De exemplu: căutarea sursei de infecție în timpul izbucnirii hepatitei C sau prezicerea eficacității terapiei utilizate.

    Standardul "aur" al genotipării HCV este determinarea directă a structurii primare a ARN VHC cu analiza filogenetică ulterioară [52], ceea ce face posibilă caracterizarea clară a acestui izolat de virus. Aceste informații pot fi obținute utilizând următoarele opțiuni de secvențiere:

  • directă;
  • pe baza clonării standard;
  • secvențierea produselor de reacție PCR (secvențierea limitată).
    În ciuda corectitudinii rezultatelor, metoda secvențială directă nu este utilizată în asistența medicală practică din cauza dificultăților tehnice ale studiului și a costului ridicat al muncii. În același timp, disponibilitatea informațiilor privind structura primară a ARN-ului HCV este o metodă de referință pentru genotipare, iar disponibilitatea instrumentelor pentru secvențierea automată simplifică obținerea rezultatului.

    În prezent, în majoritatea cazurilor, metodele bazate pe utilizarea PCR cu primeri specifici tipului sunt folosiți pentru genotiparea ARN-ului VHC. Pentru prima dată, genotiparea ARN-ului HCV a fost efectuată de N. Okamoto și co-autori în 1992 folosind RT-PCR [53], care include două etape de amplificare. Primul dintre ele a fost realizat cu primeri universal, pentru toate genotipurile HCV, al doilea cu un amestec de primeri specifici de tip, cu obținerea unor produse de amplificare specifice de diferite lungimi. Prezența unui anumit genotip a fost evaluată prin mărimea produsului amplificat. Ca primeri se folosesc sonde specifice tipului, informații despre care se află în regiunile 5'UTR, Core sau NS5 - RNVGS [54].

    Hibridizarea produselor amplificate cu sonde adsorbite de genă (din zona netranslatată a ARN-ului HCV) adsorbită pe membrana nitroceluloză stă la baza testului - denumit "INNO-LiPA HCV, INNO-GENETICS" [55]. Inițial, utilizând acest test, a fost posibil să se introducă genotipurile: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3; 4 și 5a. În viitor, sistemele de testare din cea de-a doua generație "INNO-LiPA HCV II, INNOGENETICS" ne permit să distingem toate cele 6 genotipuri și în plus 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a și 10a. [56]

    Arsenalul metodologic pentru determinarea genotipurilor VHC nu se limitează la metodele de mai sus și include diverse metode:

  • genotipare pe baza analizei profilurilor de restricție a produselor amplificate (RFLP). Produsele de amplificare ale fragmentelor de ARN VHC (regiunea 5'UTR sau regiunea NS5 a ARN-ului HCV) sunt scindate de enzime de restricție. Fragmentele rezultate diferă în funcție de locurile de restricție din interiorul lor, care sunt despicate. Rezultatele electroforezei și compararea acestora ne permit să identificăm genotipul VHC din proba studiată [57]. Comparația rezultatelor genotipării prin PCR-RFLP cu secvențierea datelor a arătat un nivel ridicat de coincidență a rezultatelor - 95% [58].
  • genotipare pe baza metodei SSCP (evaluarea polimorfismului conformational al fragmentelor ADN monocatenare). Regiunea 5'-netranslatată a ARN-ului HCV, care are un set minimal de variații de nucleotide care disting genotipurile unele de altele, a fost aleasă ca obiect de studiu. Acest fapt determină posibilitatea aplicării primerilor obișnuiți în timpul genotipării [59].

    SEROTIPAREA Anti-HCV a fost posibilă prin studiile efectuate de P.Simmonds și co-autori care au stabilit prezența anticorpilor direcți la epitopi specifici genotipului, informații despre care este codificată de regiunea NS4 a ARN-ului HCV [60]. Cu ajutorul diagnosticului pentru ELISA, construit pe baza peptidelor sintetice, a fost posibilă distingerea între cazurile de hepatită C provocate de genotipurile 1, 2 și 3 virale (89% se potrivesc cu rezultatele genotipării). Dezvoltarea sistemelor de testare folosind antigeni sintetici și recombinanți codificați de NS4 și zonele de bază ale ARN-ului HCV ne-a permis extinderea listei de tipuri de variante de virus, precum și judecarea prezenței subtipurilor (1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 4a) [61,62]. În prezent, producția comercială de produse de diagnosticare pentru serotipare se realizează în versiunea spot a ELISA - "Murekh NA 1-6 Serotyping Assay, Murex Diagnostics" și în varianta "imunoblot" - testul de serotipizare RIBA HCV, Chiron Diagnostics. Datele comparative ale rezultatelor serotipizării și genotipării ARN-ului VHC au arătat un nivel ridicat de coincidență, atingând 95% [62].

    Serotiparea anti-HCV comparativ cu genotiparea ARN-ului VHC are avantaje cum ar fi ușurința de reacție și costul redus. În același timp, această metodă nu poate în nici un caz să înlocuiască genotiparea. Rezultatele serotipării anti-HCV indică tipul de anti-HCV cu infecții curente sau anterioare. În unele cazuri (cel mai adesea la pacienții cu hemofilie), se înregistrează simultan detectarea anti-HCV a diferitelor subtipuri, ceea ce poate indica mai multe infecții cu diferite subtipuri și genotipuri VHC [63]. În plus, la pacienții cu hepatită C pe fundalul unei stări de imunodeficiență pronunțată, ARN poate fi singurul marker care face imposibilă efectuarea serotipului.

    IDENTIFICAREA ȘI TRATAMENTUL REZULTATELOR DE TESTARE A MARCERILOR SEROLOGICI DE INFECȚIE VHC. Prezența unei game largi de markeri serologici ai infecției HCV curente sau anterioare, precum și o bază metodologică modernă, permit rezolvarea multor probleme de diagnosticare și prevenire a hepatitei C. Tabelul 2 prezintă markerii serologici ai infecției VHC și domeniile cele mai importante ale testelor lor.

    Tabelul 2
    Semnificația diagnosticului markerilor infecției VHC curente sau anterioare

    screening-
    în serviciu
    de sânge

    confirmat
    DECLARAȚII
    rezultat
    + anti-HCV

    Una dintre principalele sarcini ale diagnosticului de laborator pentru hepatita C este de a diagnostica și de a distinge hepatita cronică acută de cronică prin identificarea markerilor serologici ai infecției. Ca și în cazul altor hepatite virale acute, markerii serologici ai infecției VHC apar în mod constant și dispar în cursul infecției și al procesului de vindecare (Figura 2).

    ARN-ul ARV poate fi detectat în zilele 7-21 după infecția cu HCV și anti-HCV în zilele 20-150 (o medie de 50 de zile) [64]. Spectrul de anti-HCV poate varia în funcție de perioada de hepatită acută. Se crede că primul care este capabil să identifice anticorpi codificați de zonele nucleului și NS5 ai ARN-ului HCV. Proteinele anti-HCV la codificarea zonei NS4 sunt absente în faza acută a hepatitei C [65]. Un studiu comparativ al nivelului concentrațiilor de anti-HCV, spectrul de ARN anti-HCV și HCV la pacienții cu hepatită acută și cronică a demonstrat unele diferențe [66]. În opinia noastră, aceste diferențe pot fi asociate cu caracteristicile individuale ale procesului infecțios, ceea ce le reduce valoarea diagnosticului.

    Fig. 2. Hepatită acută C

    Prin analogie cu diagnosticul de laborator al hepatitei A și B, se aștepta ca determinarea anticorpilor la IgM de clasa HCV să aibă o valoare diagnostică la fel de mare ca IgM anti-HAV și IgM anti-HBc. Cu toate acestea, datele de testare din serul pacienților cu hepatită cronică C acută și cronică pentru prezența IgM anti-HCV indică faptul că aceștia sunt adesea găsiți printre acești pacienți - 50-93% și, respectiv, 50-70% [67,68], aceste rezultate indică faptul că detectarea IgM anti - VHC nu poate fi folosit ca marker al infecției acute cu VHC.

    Absența unui marker care pretinde rolul standardului de "aur" al hepatitei acute C determină necesitatea unei evaluări complete a rezultatelor obținute, pe baza observației dinamice a pacientului.

    O direcție mai puțin importantă de utilizare a metodelor extrem de sensibile de testare a ARN-ului VHC este reducerea riscului de dezvoltare a hepatitei post-transfuzie C. Necesitatea unei astfel de activități este determinată de prezența fazei "fereastră", adică timpul dintre prima detectare a ARN-ului VHC și apariția anti-HCV, precum și existența donatorilor de sânge (pacienți cu hepatită cronică C) care au ARN VHC în absența anti-HCV. Sistemul actual de monitorizare a sângelui donat pentru VHC include doar testarea anti-VHC, iar riscul de infectare cu hepatita C rămâne. Pe baza acestor aspecte, chestiunea testării sângelui pentru prezența ARN-ului HCV folosind metode moderne (metodele NAT - "test de amplificare a acidului nucleic") este legitimă. Factorul care limitează această activitate este costul ridicat al cercetării. Pentru a reduce costurile, se recomandă testarea grupurilor serice de sânge (de la 8 până la 96 de probe) urmate de o căutare a unui eșantion pozitiv în cazul detectării ARN-ului VHC în sera de seruri. Având în vedere factorul de diluare a ARN-ului VHC dorit la însămânțarea serurilor de sânge, problema utilizării celor mai sensibile metode de detectare devine crucială. Se crede că utilizarea de kituri de diagnosticare pentru NAT - cu o sensibilitate de 50-100 UI / ml poate reduce semnificativ riscul de hepatită post-transfuzie C.

    Fără îndoială, lista problemelor care pot fi soluționate la testarea întregului spectru de markeri ai infecției cu VHC nu este limitată la aceste două zone. Disponibilitatea metodelor moderne de testare în combinație cu cunoașterea capacităților lor deschide perspective largi pentru activitatea științifică și aplicată privind hepatita C.


  • Articole Hepatita