Ce este analiza PCR și încărcarea virală?

Share Tweet Pin it

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o metodă de laborator pentru determinarea ADN și ARN. A fost testat pentru aproape o jumătate de secol de americanul Carey Mullis. Această analiză suprasensibilă este capabilă să identifice purtătorul genomului printr-o singură moleculă sursă conținută în sânge, saliva sau pe piele.

Metoda PCR are mari perspective, este folosită nu numai în medicină, ci și în ingineria genetică și știința criminalistică. Cu aceasta, clonarea și crearea de noi tipuri de ADN, determină gradul de rudenie. Un criminal este identificat de o bucată de epiteliu găsită la locul crimei.

Analiza PCR pentru hepatită - ce fac și de ce?

De ce este necesară o analiză PCR pentru hepatita C suspectată, ce este?

Virusul hepatitei C este un virus ARN care conține 6 genotipuri și până la 500 de subtipuri. Dintre toate hepatitele, acest virus are cea mai mare capacitate de mutație și depășește bariera de protecție a sistemului imunitar. Din numărul total de cazuri de hepatită, virusul C a provocat 70% din cazurile de formă cronică și 30% din ciroză și cancer de ficat.

Esența metodei: o parte din gena studiată cu ajutorul enzimelor și condițiilor speciale forțate să se înmulțească in vitro. Analiza PCR permite determinarea tulpinii de virus, fără care este imposibil să se efectueze un tratament eficient: fiecare genotip este diferit sensibil la medicamentele antivirale. Sunt utilizate două tipuri de PCR:

Terapia antivirală necesită o monitorizare constantă pentru a ajusta prompt tratamentul și, în aceste scopuri, se utilizează și reacția în lanț a polimerazei.

PCR PCR calitativ și cantitativ

PCR calitativ pe hepatita C dă răspunsul: există o tulpină de virus C în sângele pacientului și care unul. Genotiparea este necesară pentru a clarifica diagnosticul, prognosticul bolii și a determina calendarul tratamentului.

Conform clasificării acceptate, o genă este indicată de un număr, iar un subtip este o literă latină mică.

Preparare specială pe bază de substanțe naturale.

Prețul drogului

Evaluarea tratamentelor

Primele rezultate sunt resimțite după o săptămână de administrare.

Citiți mai multe despre medicament

Numai 1 dată pe zi, 3 picături

Instrucțiuni de utilizare

Depistarea tabelului de genotip C:

  • Genotipul 1a, 1b, 1c
  • Genotipul 2a, 2b, 2c, 2d
  • Genotipul 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotipul 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
  • Genotipul 5 a
  • Genotipul 6 a

Cele mai comune genotipuri 1,2,3. În Rusia, cele mai frecvente sunt 1a, 1b, 2 și 3 tulpini de virus C.

Genotipul virusului 1b este mai dificil decât alții pentru a trata, la 90% acesta devine cronic, din care 30% sunt renăscuți ca cancer de ficat sau ciroză.

Genotipurile 2a și 3a au un grad de cronică de 33-50%, mai receptiv la terapia antivirală.

Când se confirmă prezența unui virus, se efectuează un test cantitativ PCR pentru hepatita C, care este utilizat pentru a calcula numărul de molecule de ARN prezente în proba de laborator a pacientului.

Analiza de decodificare

Analiza PCR de înaltă calitate are două răspunsuri:

PCR negativ înseamnă că agentul patogen nu este detectat în probele de sânge.
Un răspuns pozitiv sugerează contrariul: se găsește ARN al unuia sau al altui genotip al virusului C.

Probabilitatea de fiabilitate a rezultatului este de 95%. Restul de 5% reprezintă o greșeală cauzată de o persoană. Această posibilitate este permisă datorită cerințelor ridicate pentru studiu:

  • reguli de stocare a reactivilor;
  • calificările corespunzătoare ale personalului medical;
  • puritatea biomaterialului.

Kitul PCR are o precizie de diagnosticare de 100%.

PCR cantitativ al ARN-ului de hepatită C face posibilă determinarea încărcăturii virale pe corpul pacientului. Cu ajutorul lui:

  • se specifică stadiul bolii (acută, cronică);
  • determină eficacitatea tratamentului antiviral;
  • Necesitatea unei biopsii hepatice este investigată.

În unele cazuri, pacientul nu simte nici un semn al bolii, în timp ce infecția VHC este detectată prin metoda PCR. Aceasta înseamnă că boala se află într-un stadiu incipient de dezvoltare sau într-o formă cronică. Sunt necesare studii suplimentare pentru a clarifica diagnosticul, pentru începerea timpurie a tratamentului antiviral.

Hepatita C incarcatura virala

Sarcina virală arată activitatea virusului hepatic, cât de activ se produce reproducerea acestuia.

Ce este asta?

Hepatita C cantitativă PCR este măsurată în unități internaționale pe 1 ml sau UI / ml, ceea ce înseamnă câte copii ale acidului ribonucleic dintr-o anumită tulpină de virus C se găsesc în 1 ml de sânge supus testului.

Ce este ridicat, ce este scăzut?

Analiza încărcării virale permite determinarea prezenței ARN viral la o concentrație de 50 UI / ml. Sarcina virală normală este atunci când nu este detectată nici o moleculă de ARN HCV prin PCR.

Tabelul încărcăturii virale:

  • concentrație scăzută de 600 UI / ml 3 * 104 UI ​​/ ml;
  • concentrație medie de la 3 * 104 UI ​​/ ml până la 8 * 105 mm;
  • nivel ridicat mai mult de 8 * 105 UI / ml.

Sarcina virală scăzută este un semnal că tratamentul terapeutic este ales corect, iar prognosticul pentru vindecarea hepatitei C este favorabil.

O concentrație mare de celule virale indică faptul că boala se află în faza acută. Sângele pacientului este o sursă periculoasă de infecție.

Sarcina virală, indicatori ai căror niveluri sunt la nivel mediu, caracterizează fie etapa cronică a HWS, fie poate avea două tendințe de dezvoltare: să crească sau să scadă.

La finalizarea sa, după 6 luni, se efectuează controlul PCR.

Costul diagnosticării PCR

Următoarele simptome trebuie să provoace îngrijorarea:

  • slăbiciune generală;
  • decolorarea pielii, sclera ochilor, descărcare;
  • greață;
  • apetit scăzut;
  • durere la nivelul mușchilor și articulațiilor;
  • greutate în hipocondrul drept;
  • niveluri ridicate de AST și ALT din sânge.

În contact cu pacienții infectați, în perioada preoperatorie se recomandă și hemodializa.

Guvernul clinic face un test de sânge pentru PCR gratuit, dacă există o sesizare de la un specialist în boli infecțioase sau un hepatolog.

Serviciile plătite pentru diagnosticarea PCR sunt furnizate în toate orașele importante din Rusia. Costul depinde de tipul de încercare, de echipamentul disponibil, de timp și de alți factori.

Analiza PCR de înaltă calitate la Moscova și Sankt-Petersburg va costa între 600 și 900 de ruble. În regiuni - de la 300 la 800 de ruble.

Determinarea încărcăturii virale hepatitice C va costa 17.000-22.000 de ruble. Pentru alte tipuri de infecții, prețul cercetării cantitative: 1200-10000 ruble.

Avantajele și dezavantajele metodei PCR

Care sunt avantajele metodei de reacție în lanț a polimerazei față de alte metode de diagnosticare?

  1. O gamă largă de aplicații. Folosind PCR, folosind echipamente standard, puteți identifica orice virus.
  2. Precizia determinării agentului patogen. Folosind diverse combinații de enzime și tehnici de analiză, se obține o specificare de 100% a studiului pentru infecția indicată.
  3. Sensibilitate ridicată. Metoda permite detectarea prezenței unei singure molecule de virus în sânge.
  4. Eficiență. Analiza calitativă este gata în câteva ore, cantitativ - în două zile.
  5. Diagnosticul virusului în perioada de incubație. În timpul PCR, agentul patogen nu este determinat de prezența anticorpilor, atunci când organismul are un răspuns imun, dar înainte de debutul procesului patologic, ceea ce facilitează tratamentul.

Dezavantajele PCR sunt rezultatul avantajelor sale:

  • puritatea analizei necesită cel mai înalt grad de puritate, inclusiv aerul din laborator, astfel încât ADN-ul "străin" să nu intre în proba studiată;
  • cerințe ridicate pentru personalul implicat în colectarea și analiza biomaterialelor.

Analiza PCR cu hepatită

PCR pentru hepatita C

  1. Hepatita C ARN ( „PCR-calitate“) - detectarea în analiza sângelui este o dovadă de hepatită acută sau cronică C se determină din a 2-a săptămână de infecție, apare înainte ca anti-HCV, care permite diagnosticarea bolii în stadii incipiente. ARN este determinat la pacienții cu clinici hepatite acute și la cei cu rezultate hepatite pozitive.
  2. Hepatita C ARN ("cantitativ PCR") - încărcarea virală este unul dintre indicatorii eficacității terapiei antivirale și evaluarea ei (prin modificarea nivelului față de valoarea inițială). Caracterizarea cantitativă a conținutului de ARN al hepatitei C este importantă pentru evaluarea eficacității terapiei antivirale și are o semnificație prognostică pentru determinarea cronicității. Pacienții cu o încărcătură virală mare (cantitate mare de ARN) înainte de tratament răspund mai puțin la tratament.
  3. Hepatita C ARN (genotipurile 1, 2, 3) - tipul de tactici de tratament și eficiența acestuia depind de tipul. Boala provocată de virusul genotipului 1 este cea mai nefavorabilă în raport cu predicția eficacității terapiei. Conform recomandărilor actuale, trebuie efectuat un test de sânge pentru a face genotiparea hepatitei C la pacienți înainte de începerea terapiei antivirale.
  4. Hepatita C ARN (subtipuri genotipice extinse 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5, 6) - 1a, 1b, 2a, 2c, 2k, 3a circulă în Rusia. Hepatita C, cauzată de virusurile genotipului 1 și 4, este cea mai nefavorabilă pentru prognoză.
  5. Ultrasensibilitatea hepatitei C PCR (metoda calitativă) - analiza este utilizată pentru a diagnostica boala în stadiile incipiente ale infecției, este optimă pentru testarea sângelui donator și evaluarea răspunsului la tratamentul antiviral. Acest studiu, chiar și fără detectarea anticorpilor la virusul hepatitei C, este recomandat pacienților cu boală hepatică de cauză nespecificată, imunodeficiență dobândită sau care primesc tratament imunosupresiv.
  6. Ultra-sensibilitatea hepatitei C PCR (metoda cantitativă) este un test unic de sensibilitate ridicată (10 UI / ml) pentru determinarea ARN-ului virusului hepatitei C în termeni cantitativi. Studiul este utilizat pentru a monitoriza eficacitatea terapiei.

PCR pentru hepatita B

  1. ADN-ul hepatitei B (analiza calitativă) este un indicator al multiplicării virusului hepatitei B. Acesta apare mai întâi în sânge, în medie, la o lună după infectare. În unele cazuri, este singurul marker al infecției latente cu VHB. Determinarea ADN-ului unui virus permite diagnosticarea hepatitei B cauzate de tulpini mutante, care nu dezvăluie alți markeri ai infecției.
  2. ADN-ul hepatitei B (analiza cantitativă) - concentrația ADN (încărcătura virală) este unul dintre testele pentru a determina stadiul hepatitei cronice B și criteriul eficacității terapiei antivirale. Analiza este efectuată înainte și în timpul procesului de tratament.
  3. Genotiparea hepatitei B - boli cauzate de diferite genotipuri ale virusului pot diferi în cursul și rezultatul clinic. Hepatita B, cauzată de un virus genotip C, are o probabilitate mai mare de a avea un curs cronic și are un risc ridicat de transformare în ciroză hepatică sau carcinom hepatocelular. Pacienții infectați cu virusul genotipului A răspund mai bine la tratament.
  4. PCR cu ADN ultrasensibil pentru hepatita B (metoda calitativă) - acestea sunt prezentate pentru depistarea precoce a bolii. Foarte informativ în studiul donatorilor de sânge. Acesta poate fi utilizat pentru a confirma eliminarea spontană sau indusă de tratament a virusului din corpul uman.
  5. PCR ultra-sensibil pentru hepatita C (metoda cantitativă) - diagnosticarea ADN-ului virusului hepatitei B în termeni cantitativi. Analiza este luată pentru a evalua eficacitatea terapiei.
  6. Determinarea mutațiilor de rezistență la medicamente antivirale lamivudina, telbivudina, entecavir, adefovir, tenofovir (treci împreună cu analiza „ADN-ului virusului hepatitic B cantitativă“). Este necesar să se predea analiza pacienților cu hepatită cronică B înainte de începerea terapiei antivirale și în timpul tratamentului cu medicamente. Rezultatul conține informații privind prezența rezistenței virusului hepatitei B la medicamentele antivirale:
    • Virusul R rezistent la medicamente antivirale (se găsesc mutații ale rezistenței la acest medicament);
    • S - virusul hepatitei B este sensibil la medicament (valoarea normală, nu sunt detectate mutații de rezistență);
    • I - agentul cauzal al infecției poate dezvolta rezistență la acest medicament.

Utilizarea diagnosticului PCR

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) în biologia moleculară este o metodă experimentală pentru detectarea virușilor. Vă permite să creșteți în mod semnificativ concentrația anumitor fragmente de acid nucleic (ADN) în probele de material biologic, ceea ce face posibilă determinarea lor (recunoașterea) și numărarea.

Analiza se efectuează după cum urmează. Materialul genetic (o probă de sânge), care poate include și gena dorită, este introdusă în tub. Există, de asemenea, primeri - segmente sintetizate chimic, cu o lungime mică a genei dorite.

ADN sau ARN polimeraza este, de asemenea, adăugată la vas, fiind capabil să alinieze un lanț al acidului nucleic care este complet identic cu cel original. Compoziția rezultată este injectată și un set de patru nucleotide libere - un material de construcții special pentru ARN sau ADN, dintre care unul conține particule radioactive de fosfor.

Amestecul rezultat este încălzit la 95-96 ° C, motiv pentru care două șuruburi ADN, care sunt în mod obișnuit împletite, sunt țesute. Apoi, medicamentul este răcit, moment în care primerii se atașează la regiunea dorită a genomului viral, împiedicând din nou ARN-ul (sau ADN-ul) să formeze din nou o dublă helix.

În procesul de răcire, polimeraza caută un lanț nucleotidic liber. Pentru funcționarea acestei enzime este necesar un singur lanț de nucleotide. Deoarece polimerazele se alunecă de-a lungul lanțului ADN (ca un inel pe o coardă), nu este capabil să lucreze pe o dublă helix.

După aceasta se efectuează un ciclu de încălzire repetat, datorită căruia lanțurile de nucleotide sunt separate. La fiecare dintre aceste cicluri de PCR, cantitatea din proba gena dorită de hepatită crește exponențial, iar restul materialului genetic este produs (crește) liniar.

După purificarea soluției din resturile nucleotidice și separarea prin electroforeză a lanțurilor ADN prin parametrul de greutate moleculară, se poate determina cu ușurință dacă există sau nu o genă dorită în proba studiată.

Beneficiile PCR

Testele de laborator folosind PCR permit obținerea și a mai multor informații decât prezența virusului ARN. Prin determinarea parametrului nivelului radiației radioactive, este posibil să se identifice cât de mult material genetic a fost conținut inițial în proba studiată. În cazul hepatitei, determinați indicatorul nivelului încărcăturii virale.

Un alt avantaj al acestei metode este gradul foarte ridicat de sensibilitate al reacției CR. Este mult mai mare decât metodele clasice de detectare a virușilor. În mod ideal, pentru a identifica gena dorită, pentru PCR, este suficient un singur virus din probă.

În plus, PCR este complet specific. Primerii săi sunt proiectați astfel încât să corespundă pe deplin regiunilor unice ale genelor dorite pe care nici o altă secvență nu le are. Ca amprentele digitale sunt unice, există secvențe nucleotidice unice în fiecare genă.

Analiza calitativă a PCR

Analiza calitativă vă permite să identificați numai prezența unui virus în sânge. Acest test trebuie efectuat pentru toți pacienții la care s-au găsit anticorpi împotriva hepatitei C. Aceasta poate avea ca rezultat numai una dintre cele două valori: "detectat" sau "nu este detectat". La o persoană sănătoasă, norma (valoarea de referință) trebuie să fie "nedetectată".

Există o interpretare specială a unor astfel de rezultate ale cercetării calitative:

  • Rezultatul este "detectat". Aceasta înseamnă că un fragment de ARN care este specific pentru virusul hepatitei C a fost găsit în proba analizată a materialului biologic realizat. În consecință, există un fapt că pacientul este infectat cu virusul hepatitei C. Dacă rezultatul PCR de înaltă calitate este "detectat", acest lucru indică faptul că virusul se multiplică și în acest moment infectează celulele hepatice noi în organism.
  • Rezultatul nu este "detectat". Un astfel de verdict arată că în eșantionul analizat de material biologic obținut în acest laborator nu a fost găsit nici un fragment de ARN care să fie specific pentru virusul hepatitei C. Alternativ, concentrația ARN a infecției patogene din această probă a fost sub limita de sensibilitate a testului.

În faza acută a ARN-ului virusului hepatitei C, astfel de studii calitative prin metoda PCR pot fi detectate deja după 1-2 săptămâni imediat după infectarea organismului, cu mult înainte de apariția anticorpilor la hepatită în sine.

Rezultatele inexacte ale acestui studiu pot fi obținute prin:

  • biomaterial contaminat;
  • prezența heparinei în sângele pacientului;
  • prezența în eșantion de substanțe chimice sau proteice (inhibitori) care afectează diferitele componente ale PCR.

Pentru a efectua o analiză calitativă a PCR, nu este necesară pregătirea specială a pacientului pentru studiu. Sângele venos este folosit ca material.

Evaluarea rezultatelor

Testele PCR de înaltă calitate au un anumit grad de sensibilitate și, în funcție de precizia cercetării, nivelul echipamentului din laborator poate varia de la 10 la 500 UI / ml.

Aceasta înseamnă că, dacă virusul din probele de sânge este prezent într-o concentrație foarte scăzută (mai mică decât pragul de sensibilitate al acestui laborator), atunci rezultatul poate fi determinat ca "nedetectat" la un pacient pacient. Din acest motiv, atunci când efectuați o analiză calitativă a PCR cu un nivel scăzut de viremie (concentrație scăzută a virusului), de exemplu, pentru pacienții supuși terapiei antivirale, este foarte important să cunoașteți pragul de sensibilitate al acestui sistem de diagnosticare.

Variante de sisteme de diagnostic

Pentru a controla răspunsul virologic, se recomandă utilizarea sistemelor de diagnosticare cu un prag de sensibilitate de cel puțin 50 UI / ml pentru tratamentul antiviral. Aceste criterii sunt îndeplinite, de exemplu, cu ajutorul analizorilor Cobas Ampicolor HCV-Test (cu precizie de 50 UI / ml), precum și a ARN-ului RealBest HCV (cu o sensibilitate de 15 UI / ml).

Conform recomandărilor OMS, pentru a stabili un diagnostic definitiv al hepatitei C, este necesar să se bazeze doar pe baza detecției triple a ARN-ului virusului C în probele serice ale unui pacient, în absența altor varietăți de markeri hepatici.

În plus față de metodele PCR, se utilizează, de asemenea, un test TMA (metoda de amplificare transcripțională) pentru detectarea ARN HCV la pacienți. Are cel mai bun prag de sensibilitate (5-10 UI / ml), dar în țara noastră o astfel de metodă de testare nu este încă foarte frecventă.

Gama modificărilor detectabile ale virusului

O astfel de determinare calitativă în serul prezenței ARN a virusului hepatitei C face posibilă determinarea mai multor genotipuri ale acestui virus. În prezent, știința cunoaște mai mult de șase genotipuri ale acestui virus, precum și aproximativ 10 subtipuri ale acestei boli.

În țara noastră, virusurile comune 1, 2, 3 genotipuri. Laboratoarele pot detecta următoarele genotipuri: 1a și 1b, 2a, 2b și 2c, precum și 3, 4, 5a și 6, indiferent de subtipuri. Pentru toate modificările de virus, specificitatea de detecție este de 100%.

Analiza cantitativă PCR

Cu ajutorul unui test cantitativ PCR, se determină nivelul concentrației virusului hepatitei în probele de sânge (încărcătura virală). Acest test pentru viremia (concentrația virusului) vă permite să determinați numărul de unități dintr-un anumit material genetic (cel mai viral ARN), care este detectat într-o anumită cantitate. În acest caz, determinați concentrația acestuia în 1 ml, care corespunde cu 1 cu. cm.

Parametrii de analiză cantitativă sunt exprimați în cifre, în acest scop sunt utilizate ca unități de măsură unitățile internaționale (UI) pe mililitru (ml), denumite UI / ml. Acum, în unele laboratoare, cantitatea de virus poate fi determinată în alte unități: numărul de exemplare pe ml este indicat ca copii / ml.

  • Date pentru hepatita C, o astfel de analiza cantitativa a PCR se face imediat inainte de inceperea tratamentului. Apoi, în săptămânile 1, 4, 12 și 24. Evaluarea pe săptămâna a 12-a este orientativă, permite determinarea eficacității terapiei.
  • Pregătirea pentru analiză. Pentru a efectua o analiză cantitativă a PCR, nu este necesară pregătirea specială a pacientului pentru studiu. Cu jumătate de oră înainte de eșantionare nu ar trebui să fumeze. Sângele venos este folosit ca material de laborator.

Evaluarea rezultatelor

Pentru diferite sisteme de testare de laborator, există diverși factori de conversie pentru acest indicator în UI / ml. În medie, ei iau un parametru de conversie, în care 4 copii / ml = 1 UI / ml. De exemplu, dacă laboratorul dă rezultatul analizei PCR 2,4 * 10 6 copii / ml, atunci acest parametru trebuie împărțit în 4 și vom obține 6 * 10 5 UI / ml.

O sarcină de 800.000 UI / ml este considerată ridicată, care corespunde aproximativ la 3.000.000 copii / ml. Viremia scăzută, conform unor autori, corespunde parametrilor PCR cantitativ sub 400.000 UI / ml.

Ca urmare a testului cantitativ, rezultatele finale pot fi furnizate nu sub forma unei valori digitale, ci: "sub domeniul de măsurare" sau "nedetectat".

  • Evaluare: "sub gama de măsurare." Acest lucru sugerează că testul cantitativ nu a putut detecta ARN viral de hepatită C, dar virusul în sine este prezent în organism în concentrații foarte scăzute. Acest lucru este evidențiat de un test calitativ suplimentar, care confirmă prezența virusului.
  • Evaluare: nu a fost detectat. Acest rezultat arată că testul cantitativ nu a fost găsit în proba ARN-ului de virus.

Parametrul încărcăturii virale determină, în primul rând, gradul de infecție al bolii, nivelul de "infecțiozitate" al pacientului. Cu cât este mai mare concentrația de virus a pacientului, cu atât este mai mare probabilitatea de a le transmite altor persoane. De exemplu, în timpul actului sexual cu o persoană bolnavă sau pe verticală. Acest indicator cantitativ ajută la determinarea eficacității tratamentului pacientului.

Efectuarea unei analize cantitative a PCC este importantă pentru terapia antivirală, evaluarea succesului și planificarea duratei cursului. Astfel, cu un răspuns rapid al organismului la tratament și un grad scăzut de viremie, durata terapiei poate fi redusă.

Dacă parametrul cantitativ PCR este redus încet, terapia antivirală trebuie prelungită sau modificată. Dacă nivelul încărcăturii virale este scăzut, atunci acesta este un factor favorabil pentru terapie, dar dacă este crescut, atunci metoda utilizată este ineficientă și medicamentele sau metodele de utilizare a acestora trebuie schimbate.

Studiu PCR pentru hepatita C: tipuri, indicații, transcript

Virusul hepatitic C este o boală gravă care apare cu afectarea ficatului. La optzeci la suta dintre pacienti, devine cronica. Virusul se înmulțește în celulele hepatice - hepatocite - și provoacă moartea lor. Țesutul moale este înlocuit cu focare de țesut conjunctiv, se dezvoltă fibroza.

Pe măsură ce se dezvoltă fibroza, ficatul nu este în măsură să-și îndeplinească funcțiile, începe ciroza hepatică, periculoasă datorită complicațiilor sale: presiune crescută în sistemul venoasei portal, sângerare gastrointestinală, coagulare sanguină afectată, modificări psihice datorate leziunilor nucleului creierului.

Cauza bolii este infecția cu un virus din familia Flaviviridae, care aparține tipului de virusuri ARN. Aceasta înseamnă că materialul genetic prin care se sintetizează proteinele agentului patogen este codificat în molecula de acid ribonucleic. Infecția are loc prin sânge, sexual, și de la o femeie însărcinată la făt. Din păcate, o perioadă suficient de mare de timp poate trece între infecție și începerea producției de anticorpi - de la două săptămâni la șase luni. Acest lucru nu permite determinarea infecției prin metoda imunotestei și începerea tratamentului în stadiile incipiente.

Ce este analiza PCR?

PCR este o metodă de analiză moleculară care permite detectarea materialului genetic al agentului patogen deja în prima săptămână după infecție utilizând reacția în lanț a polimerazei. Studiul are o specificitate ridicată, precizie și permite nu numai determinarea prezenței sau absenței virusului, ci și concentrarea și genotipul acestuia.

Pentru acest studiu, este luată sângele unui pacient în care ar putea fi localizat ARN-ul virusului. Primerii se adaugă la regiunile sintetizate artificial din sânge ale genei dorite de lungime mică, iar ARN polimeraza este o enzimă specială care crește în mod repetat cantitatea de material genetic al agentului patogen. Folosind un aparat special, se efectuează mai multe cicluri de încălzire și răcire. Apoi, materialul este analizat și comparat cu genele cunoscute ale virusului, pe baza cărora se face o concluzie cu privire la prezența sau absența infecției.

Tipuri de analize PCR pentru hepatita C

Există trei tipuri de analize PCR:

  1. Analiza calitativă a PCR. Prima etapă a studiului. Vă permite să identificați materialul genetic al virusului în sânge.

  • Analiza cantitativă a PCR. Vă permite să determinați încărcarea virală - concentrația materialului genetic al agentului patogen într-un mililitru de sânge. Acest studiu este efectuat înainte de începerea tratamentului și apoi în primul, al patrulea, al doisprezecelea, și (în cazul în care cursul este lung) de douăzeci și patrulea săptămână de tratament pentru a evalua eficacitatea acestuia.

  • Genotipare. Agentul cauzal al hepatitei C se mută frecvent și rapid. Au existat șapte variante ale acestui genotip de virus găsite pe planetă. În Rusia, primul, al doilea și al treilea tip sunt comune. Fiecare dintre genotipuri are o rezistență diferită față de terapie, de exemplu, eficacitatea tratamentului primului tip este de șaizeci la sută, iar pentru a doua și a treia această cifră atinge optzeci și cinci. Prin urmare, pentru a selecta medicamentele adecvate și pentru a prescrie un curs de tratament cu o durată suficientă, este necesar să se determine exact tipul de virus cu care este infectat pacientul.
  • Indicatii pentru analiza PCR pentru hepatita C

    Studiul PCR este prescris în următoarele cazuri:

    • contactul cu o persoană bolnavă la care s-ar putea produce infecția;
    • testul imunologic enzimatic pozitiv;
    • semne de ciroză: modificări ale mărimii ficatului, lărgirea splinei, apariția pe abdomen a plexului venoascular subcutanat;
    • apariția simptomelor de leziuni hepatice: dureri în abdomenul drept, îngălbenirea pielii;
    • creșterea activității ALT și AST în analiza biochimică a sângelui;
    • înainte de începerea tratamentului pentru a determina încărcătura virală;
    • pentru a monitoriza eficacitatea terapiei antivirale;
    • după tratament pentru a controla recaderea;
    • în prezența hepatitei B diagnosticate, pentru a exclude leziunile hepatice mixte.

    Explicarea studiilor PCR privind hepatita C

    Decodificarea analizei PCR și imunotestei enzimatice pentru hepatita C trebuie efectuată de către un specialist hepatolog sau bolnav infecțios. Analiza rezultatelor PCR este necesară în combinație cu datele analizei biochimice a sângelui, biopsiei și ultrasunetelor. Numai un medic calificat va putea analiza rezultatele cercetării și, pe baza acestora, va prescrie tratamentul corect.

    Analiza calitativă de decodificare.

    În materialul biologic analizat a fost găsit materialul genetic al agentului patogen. Infecția confirmată.

    Infecția lipsește sau cantitatea de ARN a agentului patogen este sub limita de sensibilitate.

    Decodificarea analizei cantitative.

    Rata normală pentru persoanele sănătoase. Aceasta înseamnă că nu există ARN de hepatită C în materialul studiat, sau concentrația sa este sub pragul de sensibilitate al studiului.

    Concentrația ARN este sub intervalul de cuantificare. Aceste rezultate sunt interpretate foarte atent, corelându-le cu date din alte studii, adesea re-studiate.

    Nivelul încărcăturii virale la o concentrație dată este considerat scăzut. De obicei, o scădere a cantității de virus înseamnă că terapia are succes.

    Mai mult de 8 * 10 ^ 5 UI / ml

    Nivelul încărcăturii virale la o anumită concentrație este considerat ridicat.

    Mai mult de 2,4 * 10 ^ 7 UI / ml

    Cantitatea de ARN este peste limita superioară a intervalului de cuantificare. Este imposibil să se tragă concluzii cu privire la gradul de încărcare virală cu acest rezultat. De obicei, în astfel de cazuri, testul se repetă cu diluarea unei probe de sânge.

    Decodificarea genotipării.

    Detectarea ARN a unui anumit genotip

    Virusul hepatitei C cu un anumit genotip și subtip a fost detectat în biomaterial. Rezultatul este codificat în cifre romane și litere latine, de exemplu - 1a, 2b. În total, există șapte genotipuri și șaizeci și șapte subtipuri, cu toate acestea, în Rusia există doar trei primele tipuri.

    Virusul hepatitei C a fost detectat

    ARN sa găsit în sângele unui genotip rar pentru Rusia, care nu poate fi atribuit primului, celui de-al doilea sau celui de-al treilea tip. Sunt necesare mai multe cercetări.

    Acest rezultat indică faptul că pacientul este sănătos sau că cantitatea de ARN patogen este prea mică.

    Este posibil ca analiza PCR pentru hepatita C să fie negativă, iar testul imunosorbant legat de enzimă să recunoască anticorpii împotriva virusului. Aceasta înseamnă că pacientul a avut hepatită C acută și sa recuperat singur. Aproximativ douăzeci de cazuri de infecție au ca rezultat recuperarea spontană dacă corpul pacientului are o rezistență suficientă la infecție.

    Deși PCR este un test foarte precis, rezultatele acestuia pot fi distorsionate în următoarele situații:

    • sângele a fost transportat în laborator în condiții inadecvate, temperatura a fost încălcată;
    • proba de biomaterial a fost contaminată;
    • au existat urme reziduale de heparină și alte anticoagulante în sânge;
    • Investigatorii s-au dovedit a fi inhibitori - substanțe care încetinesc sau opresc reacția în lanț a polimerazei.

    Avantajele PCR față de alte metode

    1. Diagnosticarea în primele etape. PCR detectează materialul genetic al agentului cauzal. Folosind analiza imunofluorescenței se pot determina numai imunoglobuline - substanțe pe care organismul le produce ca răspuns la o infecție. În cazul unei infecții cu hepatită C, intervalul dintre infecție și debutul răspunsului imun pot fi mai multe săptămâni și luni, în acest moment ELISA va fi ineficient. PCR va da un răspuns în prima săptămână după infecție.

  • Scăderea probabilității de eroare. În materialul studiat se determină suprafața materialului genetic, care este caracteristică numai pentru un singur tip de agenți patogeni. Aceasta elimină rezultatele false. Când erorile ELISA sunt posibile, deoarece același tip de anticorpi poate fi eliberat împotriva diferitelor virusuri - astfel de anticorpi sunt numiți anticorpi încrucișați.

  • Sensibilitate ridicată. PCR permite detectarea ARN-ului agentului cauzal chiar și în cantități minime. Acest lucru face posibilă identificarea infecțiilor ascunse.
  • Cum să vă pregătiți pentru donarea de sânge pentru studii PCR

    Pentru analiza PCR a hepatitei C, se colectează sânge venos. De obicei, două porțiuni de sânge sunt luate din vena pacientului la un moment dat: primul este trimis pentru PCR, iar cel de-al doilea prin ELISA. Acest lucru se face pentru a evalua cu mai multă precizie cât de mult este infectat un pacient cu un virus și cum se confruntă cu imunitatea împotriva acestuia.

    De obicei, pacientul trebuie să respecte următoarele reguli:

    • un test de sânge este luat dimineața;
    • Intervalul dintre ultima masă și donarea de sânge trebuie să fie de opt până la zece ore;
    • cu două sau trei zile înainte de analiză, este necesar să se abandoneze alimentele prăjite și grase și alcoolul;
    • timp de douăzeci și patru de ore înainte de analiză, pacientul trebuie să evite efortul fizic: nu purtați greutăți, nu mergeți la sală de gimnastică sau la piscină.

    Costul testelor de sânge și PCR pentru hepatita C

    Hepatita C este o patologie inflamatorie in care celulele hepatice sunt afectate. Boala se dezvoltă ca urmare a penetrării virusului hepatitei C (HVC) în corpul uman.

    Forma bolii poate fi acută sau cronică.

    Cel mai adesea, simptome de forme acute ale bolii, majoritatea pacienților nu sunt disponibile, uneori, boala este însoțită de dureri în abdomen, a scăzut de performanță, oboseală crescută, tulburări de apetit, nuanță închisă de urină, modificări de culoare de fecale, îngălbenire a pielii și mucoaselor, dureri articulare. Aceste simptome apar de obicei la 6-8 săptămâni după infectare, dar pot apărea după șase luni.

    Odată cu dezvoltarea unor astfel de fenomene, este necesar să se contacteze o instituție medicală și să fie supus unei examinări cuprinzătoare a întregului organism. Un test de sânge pentru hepatita C se efectuează ca parte a unui examen medical.

    Astăzi, cu ajutorul tehnicilor moderne de diagnosticare, această patologie poate fi identificată în stadiul inițial de dezvoltare, ceea ce sporește foarte mult șansele de vindecare completă a bolii.

    Următoarele grupuri de persoane trebuie să testeze hepatita C:

    • femeile în perioada de purtare a unui copil;
    • persoanele cu semne de hepatită;
    • personalul medical;
    • potențiali donatori de organe și de sânge;
    • dependenții de droguri, persoanele infectate cu HIV, viața promiscuă intimă.

    Lista studiilor necesare

    Ce teste trebuie să iau pentru hepatita C? Pentru a diagnostica exact boala, a identifica cauzele și a determina starea parenchimului hepatic, sunt necesare următoarele studii:

    • urină generală și teste de sânge;
    • analiza biochimică a sângelui;
    • Analiza PCR;
    • test de sânge pentru detectarea anticorpilor la HVC;
    • un test de sânge pentru anticorpii existenți la propriile celule hepatice;
    • biopsie hepatică.

    Decodificarea testelor de sânge pentru hepatita C este efectuată de un specialist. Luați în considerare fiecare metodă de cercetare în detaliu, precum și vom înțelege ce analiză a hepatitei C este cea mai corectă.

    Analiză generală

    Atunci când efectuați un test de sânge general pentru hepatita C, puteți evalua starea pacientului. Modificările parametrilor sângelui nu sunt percepute ca simptome specifice ale hepatitei, dar cu această boală există tulburări precum:

    • concentrația redusă de hemoglobină, trombocite și leucocite;
    • crește conținutul de limfocite;
    • coagularea sângelui este încălcată;
    • viteza de sedimentare a eritrocitelor (ESR) crește.

    Analiza generală a urinei face posibilă detectarea, în compoziția sa, a urobelinului - un pigment biliar care apare în urină ca urmare a funcționării insuficiente a ficatului.

    Analiza biochimică

    Analiza biochimică a sângelui la hepatita C face posibilă identificarea unor astfel de afecțiuni precum:

    • niveluri ridicate de enzime hepatice (alanin transaminază - ALT și aspartat aminotransferază - AST), care intră în sânge când hepatocitele sunt deteriorate. În condiții normale, acești indicatori pentru bărbați nu trebuie să fie mai mari de 37 UI / l, pentru femei - nu mai mari de 31 UI / l. O concentrație crescută de ALT și AST în hepatita asimptomatică C este adesea singurul simptom al acestei boli. În plus, creșterea fosfatazei alcaline a glutamil transpeptidazei în sânge (în mod normal nu este mai mare de 150 UI / l).
    • conținutul de bilirubină (atât general cât și direct) din sânge este depășit. Dacă nivelul de pigment galben în ser depășește 27-34 umol / L, icter apar (până la 80 mol / l într-un mod simplu, 86-169 pmol / L - un moderat, peste 170 mmol / l - formă severă).
    • Nivelul de albumină este redus, concentrația gama globulinelor, dimpotrivă, este crescută. Gammaglobulinele sunt alcătuite din imunoglobuline - anticorpi care protejează organismul împotriva substanțelor care provoacă boli.
    • creșterea concentrației trigliceridelor în sânge.

    Testul PCR

    Utilizând tehnica PCR, este posibil să se diagnosticheze agentul cauzal al bolii. Efectuarea acestei analize face posibilă detectarea unui virus în sânge, chiar dacă cantitatea sa este minimă. Analiza PCR pentru hepatita C face posibilă determinarea infecției existente în sânge deja după 5 zile de la momentul infecției, cu mult înainte de apariția anticorpilor.

    Dacă rezultatul unui test de sânge pentru hepatita C prin PCR este pozitiv, aceasta indică prezența unei infecții active în organism. Folosind această metodă, puteți efectua un studiu calitativ și cantitativ al ARN-ului HVC.

    În cursul analizei calitative a PCR pentru hepatita C, este posibil să se detecteze un virus existent în corpul uman.

    Această procedură de diagnosticare se efectuează dacă se detectează anti-HVC în sânge.

    Depistarea analizei pentru hepatita C conține informații despre faptul că o infecție a fost detectată sau nu a fost detectată în organism. În mod normal, nu se găsesc substanțe patologice în sânge.

    Dacă testul hepatitei C este pozitiv, înseamnă că agentul patogen se împarte în mod continuu și infectează celulele hepatice.

    Rezultatele acestei analize pot fi nesigure, este posibilă în următoarele cazuri:

    • biomaterial contaminat folosit;
    • în prezența heparinei în sânge;
    • în prezența substanțelor chimice sau proteice (inhibitori) în biomaterialul studiat, care afectează elementele PCR.

    Analiza cantitativă a hepatitei C oferă informații despre cantitatea de virus conținută în sânge, adică determină încărcătura virală. Prin acest concept se înțelege volumul de ARN HVC prezent în sânge (de exemplu, în 1 ml). În interpretarea analizei cantitative pentru hepatita C, această valoare este exprimată în echivalent digital, măsurată în UI / ml.

    Sângele pentru PCR pentru hepatita C este luat înainte de măsurile terapeutice. După ce analiza se efectuează la 1, 4, 12 și 24 de săptămâni. Studiul din săptămâna 12 este orientativ și se realizează pentru a evalua eficacitatea procedurilor medicale.

    Dacă testul pentru hepatita C în timpul sarcinii este pozitiv și valorile încărcăturii virale sunt depășite, riscul de transmitere a agenților patogeni de la mamă bolnavă la copil crește de mai multe ori. De asemenea, cu valori crescute ale încărcăturii virale, implementarea măsurilor terapeutice este dificilă.

    În conformitate cu transcrierea testelor pentru hepatita C, dacă valorile încărcăturii virale depășesc 800.000 UI / ml, atunci este mare. Dacă cifrele sunt sub 400.000 UI / ml, nivelul încărcăturii virale este considerat scăzut.

    Analiza hepatitei C prin PCR este considerată cea mai corectă și are mai multe avantaje față de alte opțiuni de cercetare, și anume:

    • diagnosticul direct al agentului cauzal al bolii. Atunci când se efectuează studii tradiționale sunt determinate de prezența markerilor de proteine ​​care sunt produse reziduale ale agenților patogeni. Acest lucru indică numai faptul că infecția este prezentă în sânge. La testarea hepatitei C prin PCR, este posibil să se determine tipul de patogen al patologiei periculoase.
    • specificitatea tehnicii. În timpul acestei proceduri, o regiune unică de ADN este determinată în biomaterial care corespunde unui singur tip de agent patogen. Acest lucru minimizează probabilitatea rezultatelor false.
    • sensibilitate ridicată. Atunci când efectuați analiza PCR, puteți detecta cantitatea minimă de virus. Acest lucru este important dacă se identifică substanțe patogene condiționate, care reprezintă o amenințare numai dacă nivelul lor crește.
    • Atunci când se utilizează această tehnică într-o probă a biomaterialului, mai mulți agenți patogeni pot fi detectați dintr-o dată.
    • poate detecta infecții ascunse. În plus, analiza vă permite să diagnosticați microorganismele patogene care trăiesc în interiorul celulelor și au o variabilitate antigenică ridicată.

    Dacă rezultatele testului sunt pozitive, atunci urme de virus se găsesc în biomaterial, atunci rețeaua are o infecție în organism.

    O analiză PCR negativă pentru hepatita C înseamnă că nu există urme de infecție în biomaterial.

    Studiu imunologic

    Această metodă vă permite să identificați anticorpi la toate tipurile de virus hepatitic, precum și anticorpi la celulele hepatice ale propriului corp, aspectul căruia contribuie la dezvoltarea hepatitei autoimune.

    Rezultatele obținute în timpul studiului sunt relevante timp de 3 luni, atunci ar trebui să redați sânge pentru hepatita C.

    De asemenea, este posibil să se efectueze un studiu expres folosind benzi speciale de testare. Această analiză face posibilă determinarea anticorpilor la virusul C în compoziția sângelui și a saliva. Această procedură poate fi efectuată independent, la domiciliu.

    Biopsie hepatică

    Pentru a efectua o astfel de analiză, se efectuează un element al parenchimului hepatic și se efectuează o examinare histologică a biomaterialului obținut. Aceasta vă permite să evaluați starea corpului: să identificați focarele inflamatorii, necrotice, stadiul fibrozei și așa mai departe.

    Astăzi sunt utilizate teste care înlocuiesc analiza histologică a parenchimului hepatic.

    Pentru a evalua stadiul afectării hepatice și intensitatea procesului de inflamație, se utilizează biomarkeri sanguin venocizi specifici. Folosind FibroTest, puteți evalua gradul de creștere a țesutului fibros.

    Când efectuați Actitest, puteți obține informații despre intensitatea proceselor patologice în parenchimul hepatic. Utilizarea Steatototesta poate diagnostica țesutul gras al ficatului și poate evalua amploarea acestui proces. Fibromax constă din toate testele de mai sus și poate include și alte studii.

    Pregătirea pentru studiu

    Ce teste sunt luate pentru hepatita C si cum am descoperit acest sau acel tip de cercetare. Este la fel de important să știți cum să vă pregătiți pentru analiză.

    Pentru a obține rezultate fiabile, se recomandă respectarea următoarelor cerințe:

    • Testele hepatice C trebuie luate dimineața, pe stomacul gol. Ultima dată când alimentele trebuie consumate cu cel puțin 8 ore înainte de studiu.
    • Biomaterialul poate fi colectat în timpul zilei sau în seara. În acest caz, este important să treacă cel puțin 5-6 ore între ultima masă și analiză.
    • înainte de donarea de sânge pentru hepatita C, ceai, cafea, suc sau alte băuturi trebuie aruncate, este permisă numai apa.
    • Cu 48 de ore înainte de studiu, este necesar să se excludă utilizarea alimentelor grase, prăjite și băuturilor care conțin alcool.
    • cu cel puțin o oră înainte de analiză, trebuie să vă abțineți de la fumat.
    • analiza nu trebuie efectuată imediat după o examinare cu ultrasunete, instrumentală, radiografie, masaj sau fizioterapie.
    • cu o zi înainte de punerea în aplicare a studiului, este necesară excluderea utilizării medicamentelor și a activității fizice intense. Stresul emoțional este de asemenea contraindicat.
    • Se recomandă să petreceți 15 minute înainte de a efectua studiul într-o stare calmă.

    Realizarea procedurii de colectare a sângelui

    În cazul în care se obține testul pentru hepatita C? Eșantionarea biomaterialului pentru cercetări viitoare se efectuează în laboratorul unei instituții medicale sau la domiciliul pacientului.

    Sângele dintr-o venă se administrează după cum urmează:

    • cu ajutorul unui turnichet special înfășurat în jurul antebratului pacientului, fluxul sanguin venos este oprit. Datorită unor astfel de manipulări, venele vor fi umplute cu sânge și vor fi mai vizibile, ceea ce va facilita foarte mult procesul de introducere a acului.
    • zona pielii în care se introduce acul este tratată cu atenție cu alcool sau lichid care conține alcool.
    • Un ac este introdus ușor într-o venă, apoi este atașat un tub de testare special conceput pentru colectarea sângelui.
    • Imediat după ce acul este introdus în venă, cablul de stoarcere este scos din brațul pacientului.
    • după ce s-a colectat volumul necesar pentru analiză, acul este îndepărtat ușor din venă.
    • un tampon steril de bumbac sau un tifon din tifon umezit cu alcool trebuie aplicat la locul injectării.
    • pentru a preveni apariția unui hematom, tamponul trebuie apăsat cu puțin efort împotriva zonei de introducere a acului, îndoiți brațul la articulația cotului și țineți-l în această poziție timp de câteva minute. Astfel de acțiuni vor ajuta, de asemenea, la stoparea mai rapidă a sângelui.

    Cu condiția ca tehnica administrării interne să fie bună, această procedură este absolut sigură și nu provoacă senzații dureroase.

    În cazuri rare, după recoltarea sângelui, venele se pot umfla. Acest fenomen se numește "flebită". O compresie (nu fierbinte) va ajuta la rezolvarea problemei, ar trebui aplicată pe zonele umflate ale pielii de mai multe ori pe zi.

    Anumite probleme pot apărea și în cazul unei tulburări de sângerare. Luarea aspirinei, warfarinei și a altor diluanți ai sângelui poate cauza sângerare. De aceea, înainte de a efectua analiza, este necesar să refuzați să luați orice medicament. Dacă tratamentul nu poate fi anulat, trebuie să informați specialistul.

    Date și prețuri

    Cât de mult este testat pentru hepatita C? Rezultatele unui test de sânge pentru hepatită pot fi gata în câteva ore și în câteva zile (de regulă, nu mai mult de 8 zile). Durata pregătirii rezultatelor depinde de tipul de virus și de metoda de analiză aleasă. Mai rapid este studiul efectuat prin metoda PCR. Rezultatele în acest caz vor fi gata în doar câteva ore.

    Cât costă un test de hepatită C? În funcție de clinică și de complexitatea studiului, prețul procedurii poate varia de la 400 la 11000 de ruble.

    Trebuie să știți că poate dura câteva săptămâni pentru a forma o cantitate suficientă de anticorpi pentru HVC. Prin urmare, într-un stadiu incipient în dezvoltarea patologiei, rezultatul unui studiu poate fi fals negativ.

    În plus, este posibilă obținerea unor date nesigure, cu analize de calitate slabă și încălcări ale condițiilor de transport a biomaterialului obținut (probele trebuie livrate la laborator maxim 2 ore după prelevarea de probe de sânge).

    Dacă rezultatul studiului este pozitiv, trebuie să contactați imediat un medic pentru boli infecțioase. Specialistul va efectua o examinare suplimentară și va prescrie tratamentul adecvat.

    Cum se poate recupera de la hepatita C cu o sansa de 97%?

    Astăzi, medicamentele moderne ale noii generații de Sofosbuvir și Daclatasvir sunt susceptibile de a vindeca hepatita C pentru 97-100%. Puteți obține cele mai recente medicamente în Rusia de la reprezentantul oficial al gigantului farmaceutic indian Zydus Heptiza. Medicamentele comandate vor fi livrate cu curier în termen de 4 zile, plata la primire. Obțineți o consultare gratuită cu privire la utilizarea medicamentelor moderne, precum și să aflați modalitățile de achiziționare, puteți să faceți pe site-ul oficial al furnizorului Zydus din Rusia.

    Analiza calitativă și cantitativă a PCR pentru hepatita C: transcript negativ, pozitiv

    Hepatita C este o boală hepatică virală cauzată de virusul flavivirus (virusul hepatitei C), a cărui structură conține o moleculă de acid ribonucleic (ARN). ARN poartă codul genetic al virusului. Prezenta sa permite analiza PCR pentru hepatita C.

    Pericolul VHC pentru o persoană constă în faptul că așa-numita fereastră serologică (timpul dintre infecție și apariția unei reacții din partea sistemului imunitar) poate fi destul de lungă - de la câteva săptămâni la șase luni.

    Nu detectează infecția și nu începe tratamentul la timp.

    În funcție de caracteristicile individuale ale organismului, purtătorul de HCV se poate manifesta într-o formă acută și poate să apară ca o boală cronică care va necesita un tratament lung și costisitor. Când se detectează anticorpi împotriva VHC, se efectuează o serie de teste de laborator, inclusiv PCR pentru hepatita C. Acest test se efectuează asupra tuturor persoanelor în ale căror sânge s-au găsit anticorpi împotriva VHC.

    Ce este analiza PCR?

    Analiza de laborator a PCR pentru hepatita C - studiul materialului biologic pentru detectarea prezenței flavavirusului.

    Reacția în lanț a reacției polimerazice (așa cum este reprezentată de abrevierea) prezintă valoarea cantitativă a leziunii virale a corpului, caracteristicile sale calitative, precum și genotipul virusului care conține ARN.

    Pe baza lor, precum și pe baza unor analize suplimentare, se determină metoda și durata terapiei, precum și factorul epidemiologic (gradul de risc de transmitere către un alt purtător).

    Ce este analiza ARN-ului hepatitei C?

    Hepatita C PCR se mai numește și analiză ARN (ARN HCV), deoarece Flavavirusul conține o particulă de ARN cu o dimensiune a virionului de 30-60 nm. Una dintre caracteristicile acestui microorganism este o înclinație mare pentru mutații.

    Fiecare dintre subspecii (genotipurile) virusului are o rezistență diferită, care determină diferite metode de tratament și natura prognosticului ulterior pentru pacient.

    Materialul biologic (sânge venos) este administrat pe stomacul gol și, de regulă, este testat prin metoda Real-Time PCR (diagnostic extrem de sensibil în timp real, cu o limită inferioară de detecție de 15 UI / ml, utilizând sisteme automate închise).

    Există și alte teste, de exemplu COBAS AMPLICOR cu o sensibilitate de 50-100 UI / ml. Pentru orice încercare de laborator, pragul de sensibilitate este important, adică capacitatea reactivului de a detecta concentrația minimă de virus în materialul biologic.

    Tipuri de analiză pentru hepatita C prin PCR

    Hepatita C PCR include trei componente importante:

    • analiza calitativă;
    • analiza cantitativă;
    • genotipare.

    Aceste teste vă permit să determinați natura viremiei, precum și caracteristicile genetice ale agentului patogen. În funcție de sensibilitatea sistemului de diagnosticare, studiul se efectuează o singură dată și, uneori, se efectuează un al doilea test cu un reactiv mai sensibil pentru a confirma sau rafina rezultatele.

    PCR de înaltă calitate a hepatitei C

    Analiza calitativă a PCR pentru hepatita C este un alt nume comun pentru analiza reacției în lanț a polimerazei. Sensibilitatea standard a testului, care permite detectarea prezenței leziunilor virale, se situează în intervalul 10-500 UI / ml.

    O analiză PCR negativă pentru hepatita C arată că concentrația virusului în sângele pacientului este sub pragul de susceptibilitate al sistemului de diagnosticare.

    Dacă PCR de înaltă calitate a dat răspunsul "nu este detectat", atunci pentru tratamentul ulterior este important să se determine pragul de sensibilitate al reactivului.

    Fracțiile de proteine ​​la flavavirus apar mult mai târziu.

    Hepatita C PCR cantitativă

    PCR hepatita C cantitativă este un indicator al încărcăturii virale, care reflectă nivelul concentrației de ARN a flavavirusului în organism. Acesta este un indicator care arată cât de multe fragmente de ARN virale sunt conținute pe centimetru cub de sânge. Rezultatele PCR ale ARN-ului hepatitic C într-un test cantitativ în sistemul convențional sunt indicate în unități internaționale pe mililitru (UI / ml) și pot fi înregistrate în diferite moduri, de exemplu 1,7 milioane sau 1,700,000 UI / ml.

    Diagnosticarea cantitativă PCR a hepatitei C este prescrisă pacienților înainte de începerea tratamentului antiviral și în săptămâna 12 de tratament, pentru a evalua rezultatele metodei alese de tratare a VHC. Sarcina virală permite determinarea a trei indicatori importanți ai bolii:

    • infecțiozitate, adică gradul de risc de transmitere a virusului de la un purtător la altul (cu cât este mai mare concentrația ARN-ului flavavirus, cu atât este mai mare probabilitatea infectării unei alte persoane, de exemplu, prin contact sexual);
    • metoda și eficacitatea tratamentului;
    • durata și prognoza terapiei antivirale (cu cât este mai mare încărcătura virală, cu atât durează mai mult tratamentul).

    Diagnosticarea cantitativă PCR a hepatitei C depinde de tipul de test de laborator și de pragul sensibilității sale. Limita inferioară a normei este considerată a fi indicatorul până la 600.000 UI / ml, valoarea medie fiind în intervalul 600.000-700.000 UI / ml. Rezultatele a 800.000 UI / ml și mai sus sunt considerate niveluri ridicate ale virusului care conține ARN.

    genotipare

    Datorită activității de mutație înaltă a VHC în natură, atunci când se testează, este important să se identifice care este genotipul virusului în sângele pacientului. În total, pe planetă au fost înregistrate 11 genotipuri ale virusului hepatitei C, care includ multe subtipuri (subtipuri). Pe teritoriul Federației Ruse au distribuit 1,2 și 3.

    Hepatita C PCR ARN împreună cu genotiparea este o componentă foarte importantă a analizei, deoarece permite medicului să determine rezistența (rezistența) virusului, să selecteze medicamentele adecvate și să prescrie un curs de tratament.

    De asemenea, genotiparea vă permite să determinați indirect starea ficatului. De exemplu, genotipul 3 al VHC este adesea însoțit de steatoză, în care se acumulează grăsime în celulele organului.

    Un test de sânge pentru PCR pentru hepatita C ar trebui să producă o cifră care să determine genotipul. Răspunsurile la laborator pot spune că nu sunt tastate - și acest lucru înseamnă că un virus este în sânge uman, care nu este detectat de sistemul de testare. Acest lucru poate indica faptul că genotipul nu este tipic pentru o anumită zonă geografică. În acest caz, trebuie să repetați analiza cu o sensibilitate mai mare a sistemului de diagnosticare.

    Decodificarea analizei PCR pentru hepatita C

    Testul pentru decriptarea cantitativă PCR a hepatitei C se poate baza pe datele de mai sus. La obținerea rezultatelor testelor de laborator, în mod obișnuit sunt scrise următoarele date:

    • "Găsit" / "nu a fost găsit" (PCR de înaltă calitate pentru hepatita C);
    • numărul de fracțiuni care conțin ARN, de exemplu 831,680 ME / ml (analiză PCR cantitativă);
    • cifra care determină genotipul VHC, de exemplu - 1, 2, 3, 4;
    • Numele testului este cel mai adesea în timp real.

    Cea mai importantă în descifrarea analizei PCR pentru hepatita C este al doilea paragraf, care arată încărcarea virală, care determină prognosticul, metoda și durata tratamentului.

    Dacă testul PCR pentru hepatita C este negativ și testul ELISA este pozitiv - ce înseamnă acest lucru?

    Pentru a descifra testele de laborator, este important să contactați un specialist hepatolog sau specialist în boli infecțioase, care va explica informațiile obținute în conformitate cu tipul de sistem de diagnosticare și pragul său de sensibilitate. În practica medicală, există multe date ale testelor de sânge care pot induce în eroare o persoană fără studii medicale.

    De exemplu, dacă testul pentru hepatita C PCR este negativ și ELISA este pozitiv, aceasta poate însemna că nu există HCV în sângele pacientului în momentul de față, dar mai devreme el a suferit o formă acută de hepatită C. Se crede că un test pozitiv imunoabsorbant legat de enzimă (ELISA) există anticorpi în sânge care au fost produși după invazia virusului în trecut. Dar, în practica medicală modernă, analiza ELISA este considerată a fi insuficient de fiabilă și adesea dă rezultate atipice, astfel încât medicii să o folosească ca screening primar. La diagnosticarea unei boli, specialiștii sunt ghidați tocmai prin teste PCR.

    Videoclip util

    Următorul videoclip oferă o descriere foarte detaliată și interesantă a esenței metodei PCR, cum este efectuată analiza:

    concluzie

    Pentru analiza PCR pentru hepatita C, se ia de obicei sânge venos. Cel mai adesea există un aport dublu de material biologic - pentru ELISA și direct pentru testul PCR. Pentru rezultatele corecte de testare, este necesară respectarea regulilor de bază pentru eșantionarea în laborator a materialului biologic:

    • sânge pentru analiză este dat în prima jumătate a zilei pe stomacul gol;
    • între masă și recoltarea sângelui ar trebui să dureze cel puțin 8 ore;
    • alcoolul și alimentele prajite ar trebui, de asemenea, să fie excluse înainte de efectuarea testului;
    • în timpul zilei înainte de donarea de sânge, este necesar să se evite efortul fizic ridicat.

    Rezultatele testelor de sânge sunt de obicei pregătite a doua zi.


    Articole Hepatita